補體凝集素/MBL途徑檢測試劑盒：助力科研的補體系統功能測定

研究目的：

Wieslab 補體系統MBL途徑試劑盒是一種酶免疫測定法，用于定性測定人血清中MBL補體途徑，其結果不得用于臨床診斷或患者管理。

概述和解釋

補體系統在慢性、自身免疫和感染性疾病中發揮著重要作用。補體激活有三個途徑（圖1），即經典途徑、替代途徑和凝集素途徑。

補體活性受損會導致人類易患重復性暴發性或嚴重感染，并可能促進自身免疫疾病的發展。補體的不適當激活會導致慢性炎癥和組織損傷。

體外補體序列的激活導致補體成分的消耗，這反過來導致它們濃度的降低。因此，補體蛋白或補體活性的測定用于指示補體系統是否已被免疫和/或病理機制激活。當懷疑補體激活性疾病或可能存在遺傳性缺陷時，功能性和免疫化學補體測量都用于評估個體。通過功能性測定（如Wieslab?補體試劑盒）評估的補體活性水平考慮了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途徑完整性的度量，與免疫化學方法相對，后者專門測量各種補體成分的濃度。

艾美捷補體凝集素/MBL途徑檢測試劑盒（WIESLAB Complement System MBL Pathway）（#COMPLMP320）的測定原理：

Wieslab 補體測定結合了補體激活的溶血測定原理和使用特定于補體激活產生的新抗原的標記抗體。產生的新抗原量與補體途徑的功能活性成正比。

在補體系統MP試劑盒中，微孔板條的孔被MBL途徑的特定激活劑包被。受試者血清在含有特定阻斷劑的稀釋液中稀釋，以確保只有MBL途徑被激活。在孔中孵育稀釋的受試者血清期間，補體通過特定包被被激活。

然后洗滌孔，并使用特定的堿性磷酸酶標記抗體檢測在MAC（膜攻擊復合物）形成期間表達的新抗原上的C5b-9。

在進一步洗滌步驟后，通過與堿性磷酸酶底物溶液孵育獲得特定抗體的檢測。補體激活量與顏色強度相關，并以吸光度（光密度（OD））來衡量。

警告和注意事項：

僅供研究使用。不用于診斷程序。

試劑盒中用于制備對照品的人血清成分已經過FDA批準的方法檢測人類免疫缺陷病毒1型和2型（HIV 1&2）、丙型肝炎（HCV）以及乙型肝炎表面抗原，結果均為陰性。因為沒有測試方法可以完全保證HIV、HCV、乙型肝炎病毒或其他傳染性因子的缺失，所以樣本和基于人類的試劑應被視為可能傳播傳染性因子進行處理。

疾病控制和預防中心以及國家衛生研究院建議在生物安全等級2下處理潛在的傳染性因子。

樣本收集：

血液樣本應使用無菌靜脈穿刺技術收集，并使用標準程序獲得血清。建議至少收集5毫升全血。讓血液在血清管中在室溫（20-25°C）下凝固60-65分鐘。離心血液樣本，并將無細胞血清轉移到干凈的管中。血清必須正確處理以防止體外補體激活。

血清應密封在緊緊封閉的管中冷凍在-70°C或更低的溫度下，以便于長期儲存或在干冰上運輸。樣本不應多次冷凍和解凍。

避免使用黃疸、乳糜和溶血的血清。

不能使用熱滅活血清。不能使用血漿。

NCCLS提供了儲存血液樣本的建議（血液樣本處理和處理程序的批準標準，H18A，1990年）。

試劑盒組件和試劑儲存

一個框架，帶有無色分離孔（12x8），密封在帶有干燥劑的鋁箔包裝中?？滓延酶事短前?。

35毫升MP稀釋液（Dil MP），標為綠色。

13毫升含有堿性磷酸酶標記的C5b-9抗體的結合物（藍色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍濃縮的洗滌溶液。

0.2毫升陰性對照（NC），含有人血清（應按受試者血清樣本稀釋）。

0.2毫升陽性對照（PC），含有凍干人血清，見下文“陽性對照的重組”。

試劑盒中的所有試劑都已準備好使用，除了洗滌溶液和對照品。試劑應儲存在2-8°C，除了陽性對照。

陽性對照應儲存在-20°C。

所需但未提供的物料或設備：

帶有405納米濾光片的微孔板讀取器。

帶有一次性吸頭的精密移液器。

用于條帶的清洗器、吸水紙、管子和一個計時器。

結果計算：

從NC、PC和樣本中減去空白（稀釋液）的吸光度。陽性對照的吸光度應大于1，陰性對照的吸光度應小于0.2。

陰性和陽性對照可以以半定量的方式用來計算補體活性。

計算樣本、PC和NC的平均OD405nm值，并按以下方式計算%補體活性：(樣本-NC)/(PC-NC)x100。陰性和陽性對照旨在監測試劑的顯著失敗。陽性對照不能確保在測定截止值處的精確度。建議每個實驗室建立自己的參考水平和缺陷的截止值。

陰性結果，即缺陷，應始終通過測試新樣本來驗證，以確保沒有發生體外補體激活。

受試者結果：

體外補體序列的激活導致補體成分的消耗，這反過來導致它們濃度的降低。因此，補體蛋白或補體活性的測定用于指示補體系統是否已被免疫和/或病理機制激活。當懷疑補體激活性疾病或可能存在遺傳性缺陷時，功能性和免疫化學補體測量都用于評估患者。通過功能性測定（如Wieslab 補體試劑盒）評估的補體活性水平考慮了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途徑完整性的度量，與免疫化學方法相對，后者專門測量各種補體成分的濃度。當發現補體成分或補體功能水平降低時，臨床醫生會考慮缺陷或正在進行的免疫過程，導致成分分解增加和補體水平降低。補體水平的增加通常是急性期反應的非特異性表現。

Wieslab 補體系統MBL途徑可以幫助檢測與MBL途徑相關的補體缺陷，如下表所示：使用Wieslab 補體系統篩選，可以更完整和深入地功能性評估所有三個補體途徑。

補體凝集素/MBL途徑檢測試劑盒文獻參考：

Walport M, Complement (First of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.

Walport M, Complement (Second of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.

Roos A, Bouwman L, Munoz J et al. , Functional characterization of the lectin pathway of complement in

human serum. Mol Immunol 2003, 39, 655-668.

Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sj?holm A. New procedure for detection of complement deficiency

by ELISA. J Imm Meth 1993, 166, 263-270.

M.A. Seelen et al, Functional analysis of the classical, alternative and MBL pathways of the complement

system: standardization and validation of a simple ELISA. J Imm Meth 2005, 296, 187-198.