WIESLAB補體系統經典途徑：精準檢測免疫功能狀態

研究目的：

Wieslab 補體系統經典途徑是一種酶免疫測定法，用于定性或半定量測定人血清中功能性經典補體途徑，其結果不得用于臨床診斷或患者管理。

概述和解釋

補體系統在慢性、自身免疫和感染性疾病中發揮著重要作用。補體激活有三個途徑（圖1），即經典途徑、替代途徑和凝集素途徑。

補體活性受損會導致人類易患重復性暴發性或嚴重感染，并可能促進自身免疫疾病的發展。補體的不適當激活會導致慢性炎癥和組織損傷。

體外補體序列的激活導致補體成分的消耗，這反過來導致它們濃度的降低。因此，補體蛋白或補體活性的測定用于指示補體系統是否已被免疫和/或病理機制激活。當懷疑補體激活性疾病或可能存在遺傳性缺陷時，功能性和免疫化學補體測量都用于評估個體。通過功能性測定（如Wieslab 補體試劑盒）評估的補體活性水平考慮了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途徑完整性的度量，與免疫化學方法相對，后者專門測量各種補體成分的濃度。

艾美捷WIESLAB補體系統經典途徑（WIESLAB Complement System Classical Pathway）（#COMPLCP310）的測定原理：

Wieslab 補體經典途徑測定結合了補體激活的溶血測定原理和使用特定于補體激活產生的新抗原的標記抗體。產生的新抗原量與補體途徑的功能活性成正比。

在補體CP試劑盒中，微孔板條的孔被經典途徑的特定激活劑包被。這與樣本稀釋緩沖液組成和血清稀釋水平相結合，確保只有經典途徑被激活。

在孔中孵育稀釋的血清期間，補體通過特定包被被激活。然后洗滌孔，并使用特定的堿性磷酸酶標記抗體檢測在MAC（膜攻擊復合物）形成期間形成的C5b-9新抗原上的C5b-9復合物。

在進一步洗滌步驟后，通過與堿性磷酸酶底物溶液孵育獲得特定抗體的檢測。補體激活量與顏色強度相關，并以吸光度（光密度（OD））來衡量。

樣本收集：

血液樣本應使用無菌靜脈穿刺技術收集，并使用標準程序獲得血清。建議至少收集5毫升全血。讓血液在血清管中凝固60-65分鐘，室溫（20-25°C）。離心血液樣本，并將無細胞血清轉移到干凈的管中。血清必須正確處理以防止體外補體激活。血清應密封在緊緊封閉的管中冷凍在-70°C或更低的溫度下，以便于長期儲存或在干冰上運輸。樣本不應多次冷凍和解凍。

不要使用黃疸、乳糜和溶血的血清。不能使用熱滅活血清。

不能使用血漿。CLSI提供了儲存血液樣本的建議（血液樣本處理和處理程序的批準標準-程序，H18A，1990年）。

試劑盒組件和試劑儲存：

一個框架，帶有無色分離孔（12x8），涂有人類IgM，密封在帶有干燥劑的鋁箔包裝中。

2 x 35毫升CP稀釋液（Dil CP），標為藍色。

13毫升含有堿性磷酸酶標記的C5b-9抗體的結合物（藍色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍濃縮的洗滌溶液。

0.2毫升陰性對照（NC），含有人血清（應按個體血清樣本稀釋）。

凍干陽性對照（PC），含有凍干人血清，需在0.2毫升蒸餾水中重組，見下文“陽性對照的重組”。

凍干活性對照（AC），用于半定量應用，含有凍干人血清（與PC來源不同），見“半定量應用程序下的活性對照重組”。

陽性對照和活性對照應到達后儲存在-20°C。

請注意：AC的重組體積在分析證書（CoA）（XXX微升）和AC標簽上標明。

試劑盒中的所有試劑都已準備好使用，除了洗滌溶液和對照品。試劑應儲存在2-8°C，除了陽性對照和活性對照。重組的陽性對照和活性對照應儲存在-70°C，并且只能解凍一次。

所需但未提供的物料或設備：

帶有405納米濾光片的微孔板讀取器。

帶有一次性吸頭的精密移液器。

用于條帶的清洗器、吸水紙、管子和一個計時器。

程序 定性應用：

僅取出所需數量的孔，小心重新密封鋁箔包裝。在分析前讓所有溶液平衡至室溫（20-25°C）。不要在不同批次的試劑之間混合。

洗滌溶液的準備

如果濃縮洗滌溶液瓶中觀察到鹽晶體，將瓶子置于37°C水浴中直到晶體溶解，然后再稀釋洗滌溶液。

將30毫升30倍濃縮洗滌溶液稀釋在870毫升蒸餾水中。當儲存在2-8°C時，稀釋后的洗滌溶液穩定直到試劑盒的有效期。

預期結果：

當發現補體成分或補體功能水平降低時，臨床醫生會考慮缺陷或正在進行的免疫過程，導致成分分解增加和補體水平降低。

對于定性測定，正常分布已確定為陽性對照的69-129%，見表1。在此范圍內的結果表明經典途徑的功能正常。建議每個實驗室確認或建立自己服務人群的參考范圍。

低于69-129%范圍的值表明要么由于經典補體途徑容量的消耗導致增加的激活，要么基因決定的低活性。

低于5%的值強烈表明由于過度激活或經典途徑的遺傳性缺陷導致的完全缺乏。為了確定導致活性降低的補體因子，需要進一步分析補體蛋白。

陰性結果，即懷疑缺乏，應始終通過測試新的、仔細處理的樣本來驗證，以確保沒有發生體外補體激活。

補體水平的增加通常是急性期反應的非特異性表現。

Wieslab 補體系統經典途徑可以幫助檢測與經典途徑相關的補體缺陷，如下表所示：使用Wieslab 補體系統篩選，可以更完整和深入地功能性評估所有三個補體途徑。

WIESLAB補體系統經典途徑文獻參考：

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