WIESLAB補體系統替代途徑：定性測定人血清中功能性替代補體途徑

Wieslab補體系統替代途徑試劑盒（WIESLAB Complement System Alternative Pathway）是一種酶免疫測定法，用于定性測定人血清中功能性替代補體途徑。僅供體外診斷使用。

概述和解釋：

補體系統在慢性、自身免疫和感染性疾病中發揮著重要作用。補體激活有三個途徑（圖1），即經典途徑、替代途徑和最近發現的MBL途徑。

補體活性受損會導致人類易患重復性暴發性或嚴重感染，并可能促進自身免疫疾病的發展。補體的不適當激活會導致慢性炎癥和組織損傷。

艾美捷Wieslab補體系統替代途徑試劑盒（WIESLAB Complement System Alternative Pathway）（#COMPLAP330）的測定原理：

Wieslab 補體測定結合了補體激活的溶血測定原理和使用特定于補體激活產生的新抗原的標記抗體。產生的新抗原量與補體途徑的功能活性成正比。

在補體系統AP試劑盒中，微孔板條的孔被特定的替代途徑激活劑包被?；颊哐逶诤刑囟ㄗ钄鄤┑南♂屢褐邢♂專源_保只有替代途徑被激活。在孔中孵育稀釋的患者血清期間，補體通過特定包被被激活。

然后洗滌孔，并使用特定的堿性磷酸酶標記抗體檢測在MAC形成期間表達的新抗原的C5b-9。

在進一步洗滌步驟后，通過與堿性磷酸酶底物溶液孵育獲得特定抗體的檢測。補體激活量與顏色強度相關，并以吸光度（光密度（OD））來衡量。

試劑盒組件和試劑儲存：

一個框架，帶有無色分離孔（12x8），密封在帶有干燥劑的鋁箔包裝中?？妆籐PS包被。

35毫升AP稀釋液（Dil AP），標為紅色。

13毫升含有堿性磷酸酶標記的C5b-9抗體的結合物（藍色）。

13毫升即用型底物溶液。

30毫升30倍濃縮的洗滌溶液。

0.2毫升陰性對照（NC），含有人血清。（應按患者血清樣本稀釋）。

0.2毫升陽性對照（PC），含有凍干人血清，見下文“陽性對照的重組”。

試劑盒中的所有試劑都已準備好使用，除了洗滌溶液和對照品。試劑應儲存在2-8°C，除了陽性對照。陽性對照必須儲存在-20°C。

所需但未提供的物料或設備：

帶有405納米濾光片的微孔板讀取器。

帶有一次性吸頭的精密移液器。

用于條帶的清洗器、吸水紙、管子和一個計時器。

操作程序：

僅取出所需數量的孔，小心重新密封鋁箔包裝。在分析前讓所有溶液平衡至室溫（20-25°C）。

洗滌溶液的準備

如果濃縮洗滌溶液瓶中觀察到鹽晶體，將瓶子置于37°C水浴中直到晶體溶解，然后再稀釋洗滌溶液。將30毫升30倍濃縮洗滌溶液稀釋在870毫升蒸餾水中。當儲存在2-8°C時，稀釋后的洗滌溶液穩定直到試劑盒的有效期。

陽性對照的重組：

輕輕敲擊所有凍干物料至瓶底并取下蓋子。立即向凍干物料中加入200微升蒸餾水。重新蓋上蓋子。讓瓶子在冰上放置5分鐘，然后輕輕搖晃或偶爾渦旋直到完全溶解。按患者血清樣本的方式稀釋重組對照品。重組對照品如果保持在2-8°C或冰上，可在使用前儲存長達4小時。它可以在-70°C下冷凍并解凍一次。

血清：

通過在37°C水浴中短暫放置并輕輕混合，部分解凍冷凍血清。部分解凍后，立即將管子放入冰浴中，并在冰上放置直到完全解凍。在渦旋混合器上短暫混合。

血清稀釋：

用AP稀釋液（紅色標簽）按1/18的比例稀釋血清（340微升稀釋液+20微升血清）。稀釋后的血清在分析前可以放置在室溫下最多60分鐘。

樣品孵育：

根據圖示，每個途徑按重復孔加入100微升的空白（Dil AP）、陽性對照（PC）、陰性對照（NC）和稀釋的患者血清（P）。在+37?C下孵育60-70分鐘。

預期結果：

體外補體序列的激活導致補體成分的消耗，這反過來導致它們濃度的降低。因此，補體蛋白或補體活性的測定用于指示補體系統是否已被免疫和/或病理機制激活。當懷疑補體激活性疾病或可能存在遺傳性缺陷時，使用功能性和免疫化學補體測量來評估患者。通過功能性測定（如Wieslab 補體試劑盒）評估的補體活性水平考慮了成分的合成、降解和消耗速率，并提供了途徑完整性的度量，與免疫化學方法相對，后者專門測量各種補體成分的濃度。當發現補體成分或補體功能水平降低時，臨床醫生會考慮缺陷或正在進行的免疫過程，導致成分分解增加和補體水平降低。補體水平的增加通常是急性期反應的非特異性表現。

Wieslab 補體系統AP可以幫助檢測與替代途徑相關的補體缺陷，如下表所示：使用Wieslab 補體系統篩選，可以更完整和深入地功能性評估所有三個補體途徑。

WIESLAB補體系統替代途徑文獻參考：

Walport M, Complement (First of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1058-1066.

Walport M, Complement (Second of two parts) N Engl J Med 2001, 344, 1140-1144.

Roos A, Bouwman L, Munoz J et al., Functional characterization of the lectin pathway of

complement in human serum. Mol Immunol 2003, 39, 655-668.

Nordin Frediksson G, Truedsson L, Sj?holm A. New procedure for detection of complement

deficiency by ELISA. J Imm Meth 1993, 166, 263-270.

M.A. Seelen et al, Functional analysis of the classical, alternative and MBL pathways of the

complement system: standardization and validation of a simple ELISA. J Imm Meth 2005,

296,187-198