BPS Bioscience TNFR2 HEK293 細胞系：篩選和表征TNFR2抗體

描述

重組HEK293細胞系，穩定表達人類TNFR2基因（TNFRSF1B或CD120b，NM_001066.3），受CMV啟動子控制。

背景

腫瘤壞死因子受體2（TNFR2，也稱為TNFRSF1B或CD120b）是TNF蛋白超家族的一種跨膜受體，能夠結合多效性的促炎細胞因子腫瘤壞死因子-α（TNF-α）。TNFR2可以在幾種T細胞亞群中找到，如調節性CD8+ T細胞（Tregs）和CD4+腫瘤浸潤性T細胞、髓系細胞和某些癌癥類型，它涉及自身免疫疾病、移植物抗宿主病和癌癥。TNFR2已成為癌癥免疫療法的一個有吸引力的靶點，其作為癌基因和免疫調節因子的不同功能正在被探索。TNFR2還表現出神經保護特性，并促進組織再生，使其成為治療阿爾茨海默病的有前景的潛在治療靶點。

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應用

? 篩選和表征TNFR2抗體。

? 在HEK293細胞中研究TNFR2信號傳導。

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃冷凍細胞瓶大約60秒。一旦細胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部內容物轉移到含有10毫升預溫的解凍培養基1（不含普魯霉素）的試管中。在37°C水浴中放置過久會導致細胞活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預溫的解凍培養基1（不含普魯霉素）中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C的5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養基1（不含普魯霉素），并在37°C的5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。對于第一次傳代及后續傳代，使用生長培養基1N（含普魯霉素）。

細胞傳代

1. 抽吸培養基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1N并轉移到試管中。以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基1N（含普魯霉素）中重懸細胞。按照推薦的次培養比例范圍1:8至1:10，每周一次或兩次接種到新的培養容器中。

細胞冷凍

1. 抽吸培養基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1N并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C的冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞至約2 x 10^6細胞/毫升。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中進行長期儲存。

數據展示：

圖1：TNFR2 HEK293細胞系中TNFR2的表達。

TNFR2 HEK293細胞（綠色）或對照親本HEK293細胞（藍色）用PE偶聯的抗TNFR2抗體（Biolegend #358404）染色，并通過流式細胞儀分析。Y軸是細胞數量百分比。X軸是PE的強度。

文獻參考：

1. Chen X, et al. (2017). Science Signaling, 10(462): 2328

2. Chopra M, et al. (2016) Exogenous TNFR2 activation protects from acute GvHD via host T reg cell

expansion. Journal of Experimental Medicine 213: 1881-1900

3. Medler J, et al. (2022) Tumor Necrosis Factor Receptor 2 (TNFR2): An Emerging Target in Cancer Therapy.

Cancers 14(11): 2603

4. Vanamee ?. and Faustman D. (2017). TNFR2: A Novel Target for Cancer Immunotherapy. Trends in

Molecular Medicine, 23(11): 1037-1046

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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