BPS Bioscience TRα-GAL4 熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系（甲狀腺激素受體α通路）TRα信號傳導研究專用

描述

TRα-GAL4熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種表達螢火蟲熒光素酶的HEK293細胞系，該熒光素酶受GAL4上游激活序列（UAS）的控制，同時穩定表達與GAL4的DNA結合域（DBD）融合的人甲狀腺受體α配體結合域。該系統允許特異性檢測甲狀腺激素誘導的甲狀腺受體α的激活，與其他核受體的交叉反應性低。該細胞系已通過三碘甲狀腺原氨酸（T-3）的刺激進行了驗證。

背景

甲狀腺激素對于調節身體的新陳代謝、整體生長和發育至關重要。這些激素通過核受體TRα和TRβ發揮作用，它們分別由THRA和THRB基因編碼。甲狀腺激素受體作為依賴配體的轉錄因子，通過與共激活因子、共抑制因子以及其他一般轉錄因子的相互作用來調節目標基因的產生。TRα在人體中的表達不同，廣泛存在于中樞神經系統、心臟、骨骼肌和消化道，而TRβ在肝臟、腎臟、垂體和下丘腦中表達。研究發現，THRA基因中的多種突變與對甲狀腺激素α的抵抗和組織特異性甲狀腺功能減退癥相關。

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細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃冷凍細胞瓶大約60秒。一旦細胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部內容物轉移到含有10毫升預溫的解凍培養基1的試管中。

注意：在37°C水浴中放置過久會導致細胞活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預溫的解凍培養基1中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C的5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養基1，并在37°C的5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基1M。

細胞傳代

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1M并轉移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基1M中重懸細胞。

4. 按照推薦的次培養比例1:6至1:12，每周一次或兩次接種到新的培養容器中。

細胞冷凍

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1M并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C的細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞至約2 x 10^6細胞/毫升。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中進行長期儲存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10瓶以備將來使用。

數據展示：

圖1.TRα-GAL4熒光素酶報告基因HEK293細胞系對T-3的劑量反應曲線。

TRα-GAL4熒光素酶報告基因HEK293細胞在96孔板格式中用逐漸增加濃度的T-3處理。使用ONE-Step?熒光素酶檢測系統測量熒光素酶活性。結果表示為與未經處理的細胞（未刺激對照）活性相比，熒光素酶報告基因表達的倍數誘導。

文獻參考：

Bochukova E., et al., 2012 New England Journal of Medicine 366(3): 243-249.

Moran C., et al., 2015 Best Pract Res Clin Endocrinol Metab 29(4):647-57.

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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