BPS Bioscience TGFβ/Activin A-響應熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系，多功能研究

TGFβ/Activin A響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種表達螢火蟲熒光素酶報告基因的HEK293細胞系，該報告基因受SMAD響應元件（SMAD結合元件，SBE）的控制。該細胞系監測TGFβ（轉化生長因子β）/SMAD信號通路的活性。

該細胞系已通過人類TGFβ1激活以及對TGFβ1超家族其他細胞因子如Activin A、GDF-8/Myostatin和GDF-11/BMP-11的響應進行了驗證。人類TGFβ1和Activin A誘導的熒光素酶活性可被SB525334降低，SB525334是TGFβ1受體的抑制劑。Activin A、GDF-8/Myostatin和GDF-11/BMP-11誘導的熒光素酶活性可被Bimagrumab降低，Bimagrumab是ActRII的抗體。Activin A誘導的熒光素酶活性也可被Activin Blocker降低，Activin Blocker是ActRIIA-Fc融合蛋白，以及抗TGFβ抗體。

背景

TGFβ信號通路參與了多種細胞過程，如生長和分化、細胞周期停滯和免疫調節。TGFβ信號與心臟病、癌癥、阿爾茨海默病等疾病有關。TGFβ蛋白結合到細胞表面受體，啟動一個信號級聯反應，導致信號蛋白SMAD2（母親反對十指發育同源物2）和SMAD3的磷酸化和激活，然后與SMAD4形成復合物。SMAD復合物被轉移到細胞核，并結合到目標基因啟動子中的SMAD結合元件（SBE），導致TGFβ/SMAD響應基因的轉錄和表達。理解和調控這一通路可以為癌癥治療的方法開發提供重要線索。

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應用

? 監測TGFβ信號通路的激活。

? 篩選調節TGFβ/SMAD信號通路的化合物。

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃冷凍細胞瓶大約60秒。一旦細胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部內容物轉移到含有10毫升預溫的解凍培養基1的試管中。

注意：在37°C水浴中放置過久會導致細胞活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預溫的解凍培養基1中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25或T75培養瓶中，并在37°C的5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養基1，并在37°C的5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基1B。

細胞傳代

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1B并轉移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基1B中重懸細胞。

4. 按照推薦的次培養比例1:5至1:10，每周一次或兩次接種到新的培養容器中。

注意：解凍后和細胞密度低時，細胞可能生長速度較慢。在這些情況下，建議以1:4的比例分離細胞。經過幾次傳代后，細胞生長速度增加，可以使用更高的比例進行分離。

細胞冷凍

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1B并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C的細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞至約2 x 10^6細胞/毫升。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中進行長期儲存。

注意：建議在早期傳代時擴增細胞并至少冷凍10瓶以備將來使用。

數據展示：

圖：TGFβ1激動劑在TGFβ/Activin A響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞系中誘導報告基因激活。

TGFβ/Activin A響應型熒光素酶報告基因HEK293細胞與逐漸增加濃度的人類TGFβ1（#90900）共同孵育18小時。使用ONE-Step?熒光素酶檢測系統（#60690）測量熒光素酶活性。結果表示為與無激動劑的細胞活性相比，SBE熒光素酶報告基因表達的倍數誘導。

文獻參考：

Moustakas A, et al., 2001 J. Cell Science. 114: 4359-69.

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