BPS Bioscience TetR HEK293 細胞系：用于研究四環素調控機制的細胞模型

TetR HEK293細胞系是一種表達四環素抗性元件（TetR）阻遏蛋白的HEK293細胞系，構建了一個基于四環素或多西環素在細胞培養基中存在與否的可誘導系統。這些細胞可以轉染感興趣的靶基因，該基因受強啟動子和四環素操縱子的控制。在沒有四環素或多西環素的情況下，TetR結合到操縱子上并抑制轉錄。當接觸到四環素或多西環素時，TetR對四環素抗性元件的親和力降低，從而發生感興趣的靶基因的表達。該細胞系已通過多西環素刺激進行了驗證。

背景

TetR，或四環素阻遏蛋白在四環素（Tc）抗生素抗性發展中發揮作用。Tc是一類通過干擾蛋白質合成來殺死細菌的抗生素。對Tc的抗性是通過表達Tc抗性基因發生的，這些基因由TetR調節。除了研究抗生素抗性的機制外，TetR的使用已被用作調節啟動子表達的模式，從而創建可誘導的細胞模型。這些可誘導的細胞模型對于理解細胞途徑至關重要。

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應用

瞬時四環素誘導的感興趣靶蛋白的表達。

細胞解凍

1. 在37°C水浴中搖晃冷凍細胞瓶大約60秒。一旦細胞解凍（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中全部內容物轉移到含有10毫升預溫的解凍培養基1的試管中。

注意：在37°C水浴中放置過久會導致細胞活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預溫的解凍培養基1中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25培養瓶中，并在37°C的5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活性。更換為新鮮的解凍培養基1，并在37°C的5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基1H。

細胞傳代

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1H并轉移到試管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基1H中重懸細胞。

4. 按照推薦的次培養比例1:8至1:20，每周一次或兩次接種到新的培養容器中。

注意：解凍后和細胞密度低時，細胞可能生長速度較慢。在這些情況下，建議以1:4的比例分離細胞。經過幾次傳代后，細胞生長速度增加，可以使用更高的比例進行分離。

細胞冷凍

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1H并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C的細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞至約2 x 10^6細胞/毫升。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將小瓶轉移到液氮中進行長期儲存。

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