BPS Bioscience Wnt信號通路活性監測：TCF/LEF 報告基因 - HEK293 細胞系（Wnt 信號通路）

TCF/LEF報告基因-HEK293細胞系（Wnt信號通路）含有一個受TCF/LEF響應元件控制的螢火蟲熒光素酶基因，該基因已穩定整合入HEK293細胞中。該細胞系已驗證對小鼠和人類Wnt3a的刺激反應，以及對Wnt/β-連環蛋白信號通路抑制劑的處理反應。

背景

TCF/LEF報告基因-HEK293細胞系（Wnt信號通路）旨在監測Wnt/β-連環蛋白信號通路的活性。Wnt通路控制著胚胎發育、成年器官維持和疾病中大量且多樣化的細胞命運決定。Wnt蛋白結合到細胞表面受體，啟動一個信號級聯反應，導致β-連環蛋白的穩定化和核轉移。β-連環蛋白隨后結合到核內的TCF/LEF轉錄因子，導致Wnt響應基因的轉錄和表達。

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應用

? 監測Wnt信號通路的活性。

? 篩選Wnt/β-連環蛋白信號通路的化合物活性。

細胞培養協議

細胞解凍

1. 為了解凍細胞，建議快速將液氮中的冷凍細胞在37°C水浴中解凍，轉移到含有10毫升解凍培養基1（不含遺傳素）的試管中，以1000轉/分鐘的速度離心細胞，重懸細胞于5毫升預溫的解凍培養基1（不含遺傳素）中，將重懸的細胞轉移到T25培養瓶中，并在37°C的5% CO2培養箱中培養過夜。

2. 第二天，用新鮮的預熱解凍培養基1（不含遺傳素）更換培養基，并在37°C的CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好分裂。

3. 細胞應在達到完全融合前進行分裂。

4. 在第一次傳代時切換到生長培養基1B（含遺傳素）。

細胞傳代

1. 為了傳代細胞，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 分離后，加入生長培養基1B（含遺傳素）并轉移到試管中，離心細胞，重懸細胞于生長培養基1B（含遺傳素）中，并將適量的細胞懸浮液接種到新的培養容器中。

3. 次培養比例：每周1:5至1:10或每周兩次。

注意：解凍后和在低密度時，細胞可能生長速度較慢。建議在培養初期以大約1:4的比例分離細胞。經過幾次傳代后，細胞生長速度增加，可以以更高的比例分離細胞。

細胞冷凍

1. 為了冷凍保存細胞，去除培養基，用磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05%胰蛋白酶/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 分離后，加入生長培養基1B并計數細胞，然后轉移到試管中，離心細胞，并在4°C冷凍培養基（BPS Bioscience #79796或10% DMSO + 90% FBS）中重懸至約2 x 10^6細胞/毫升。

3. 將1毫升的細胞等分到冷凍小瓶中。將小瓶放置在保溫容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

4. 次日轉移到液氮中儲存。

注意：建議擴增細胞并在早期傳代時至少冷凍10瓶細胞以備將來使用。

IWR-1-endo抑制劑量反應曲線。結果以發光百分比表示。在沒有IWR-1-endo的情況下用Wnt3a刺激的細胞的背景減去的發光量設定為100%。

圖:IWR-1吲哚抑制劑量反應曲線。結果以發光百分比顯示。這個在不存在IWR-1-endo的情況下，用Wnt3a刺激的細胞的背景減光發光設置為100%.

文獻參考：

1. Clevers, H. (2006) Wnt/beta-catenin signaling in development and disease. Cell 127(3):469-480.

2. Chen, B. et al. (2009) Small molecule-mediated disruption of Wnt-dependent signaling in tissue regeneration and cancer. Nature Chemical Biology 5(2):100-10

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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