BPS Bioscience RARβ 熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系的生物學作用

RARβ熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種經過工程改造的HEK293細胞系，表達由視黃酸反應元件控制的螢火蟲熒光素酶，并含有全長人類RARβ（登錄號#P10826-2）。RARβ熒光素酶報告基因HEK293細胞系旨在監測RARβ的活性。該細胞系通過全反式視黃酸（ATRA）刺激進行了功能性驗證。

圖1：RARγ熒光素酶報告基因HEK293細胞系的作用機制圖示。在視黃酸激活后，RAR與RXR二聚化，并激活RARE和熒光素酶表達。激活水平與熒光素酶信號直接對應。

背景：

視黃酸受體（RAR）屬于核受體家族，有三種亞型，即RARα、RARβ和RARγ。RAR與視黃酸X受體（RXR）異二聚化，并作為轉錄因子調節正常和惡性細胞的生長和分化。當RAR與其配體結合，全反式視黃酸或9-順式視黃酸時，RAR/RXR異二聚體結合到目標基因啟動子區域的視黃酸反應元件，并招募共激活蛋白，導致轉錄和下游目標基因的表達。RARβ功能障礙可能導致宮頸癌。異常的啟動子DNA高甲基化也與癌癥有關。

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應用：

- 監測RARβ調控的信號通路活性。

- 篩選RARβ的激動劑或拮抗劑。

細胞培養協議：

細胞解凍：

1. 在37°C水浴中旋轉冷凍細胞瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中的內容轉移到含有10毫升預熱的解凍培養基6的管中。在37°C水浴中放置細胞太久會導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預熱的解凍培養基6中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25培養瓶中，并在37°C、5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養基6，并在37°C、5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基6A。

細胞傳代：

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基6A并轉移到管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基6A中重懸細胞。

4. 按照推薦的次培養比例1:10至1:20每周兩次將細胞種植到新的培養容器中。

細胞冷凍：

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1G并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞，細胞濃度約為2 x 10^6細胞/ml。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍瓶中。將瓶子放入絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將瓶子轉移到液氮中進行長期存儲。

注意：建議擴展細胞并在早期傳代時至少冷凍10瓶細胞以備將來使用。

圖2：RARβ熒光素酶報告基因HEK293細胞系對全反式視黃酸（ATRA）的劑量反應曲線。細胞與逐漸增加的ATRA孵育。使用ONE-Step?熒光素酶檢測系統測量熒光素酶活性。結果以RAR熒光素酶報告基因表達的倍數誘導顯示。

文獻參考：

Petkovich M., et al., 1987 Nature 330(6147): 444-450.

Allenby G., et al., 1993 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(1): 30-34.

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

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