BPS Bioscience 基因調控與藥物篩選平臺：RARγ 熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系

RARγ熒光素酶報告基因HEK293細胞系是一種經過工程改造的HEK293細胞系，表達由視黃酸反應元件（RARE）控制的螢火蟲熒光素酶，并含有全長人類RARγ（視黃酸受體γ）（登錄號# P13631-1）。RARγ熒光素酶報告基因HEK293細胞系旨在監測RARγ的活性。該細胞系通過全反式視黃酸刺激和西方印跡分析進行了功能性驗證。

圖1：RARγ熒光素酶報告基因HEK293細胞系的作用機制圖示。在視黃酸激活后，RAR與RXR二聚化，并激活RARE和熒光素酶表達。激活水平與熒光素酶信號直接對應。

背景：

視黃酸受體γ（RARγ），也稱為NR1B3（核受體亞家族1，組B，成員3），屬于核受體家族，有三種亞型，即RARα、RARβ和RARγ。RAR與視黃酸X受體（RXR）異二聚化，并作為轉錄因子調節正常和惡性細胞的生長和分化。當RAR與其配體結合，全反式視黃酸或9-順式視黃酸時，RAR/RXR異二聚體結合到目標基因啟動子區域的視黃酸反應元件，并招募共激活蛋白，導致轉錄和下游目標基因的表達。RARγ可在T細胞中找到，它參與胸腺細胞發育和CD8+ T細胞反應。在造血過程中，它在造血干細胞中高水平存在。它可能作為一種癌基因，導致結直腸癌、腎癌和肝細胞癌以及急性髓細胞性白血?。ˋML）。開發RAR拮抗劑，無論是選擇性的還是廣譜特異性的，可能在癌癥治療中證明是一種有用的治療選擇。

作為BPS Bioscience在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦BPS Bioscience熱銷產品RARγ 熒光素酶報告基因 HEK293 細胞系。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

應用：

- 監測RARγ調控的信號通路活性。

- 篩選RARγ的激動劑或拮抗劑。

細胞培養協議：

注意：HEK293細胞源自人類材料，因此建議采取適當的安全預防措施。

細胞解凍：

1. 在37°C水浴中旋轉冷凍細胞瓶大約60秒。細胞解凍后（可能比60秒稍快或稍慢），迅速將瓶中的內容轉移到含有10毫升預熱的解凍培養基6的管中。在37°C水浴中放置細胞太久會導致活性迅速喪失。

2. 立即以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在5毫升預熱的解凍培養基6中重懸細胞。

3. 將重懸的細胞轉移到T25培養瓶中，并在37°C、5% CO2培養箱中培養。

4. 培養24小時后，檢查細胞附著和活力。更換為新鮮的解凍培養基6，并在37°C、5% CO2培養箱中繼續培養，直到細胞準備好傳代。

5. 細胞應在完全融合前傳代。在第一次傳代及后續傳代中，使用生長培養基6A。

細胞傳代：

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗細胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基6A并轉移到管中。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在生長培養基6A中重懸細胞。

4. 按照推薦的次培養比例1:10至1:20每周兩次將細胞種植到新的培養容器中。

細胞冷凍：

1. 抽吸培養基，用無Ca2+/Mg2+的PBS沖洗細胞，并用0.05% Trypsin/EDTA從培養容器中分離細胞。

2. 一旦細胞分離，加入生長培養基1G并計數細胞。

3. 以300 x g的速度離心細胞5分鐘，去除培養基，并在4°C細胞冷凍培養基（BPS Bioscience #79796）中重懸細胞，細胞濃度約為2 x 10^6細胞/ml。

4. 將1毫升的細胞懸浮液分裝到每個冷凍瓶中。將瓶子放入絕緣容器中緩慢冷卻，并在-80°C下過夜保存。

5. 次日將瓶子轉移到液氮中進行長期存儲。

注意：建議擴展細胞并在早期傳代時至少冷凍10瓶細胞以備將來使用。

圖:RARγ在RARγ熒光素酶報告基因HEK293細胞系中的表達。在RARγ熒光素酶報告細胞（泳道2）和HEK293細胞中進行Western Blot分析（泳道3）用抗人RARγ抗體（圣克魯斯生物技術公司#sc-398065）。表達GAPDH用作負荷對照。分子量標記如泳道1所示。

相關產品：

Products Catalog # Size

RARα Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 60503 2 vials

RARβ Luciferase Reporter HEK293 Cell Line 60603 2 vials

RARα Reporter Cellular Assay Pack 79322 2 vials

RARβ Reporter Cellular Assay Pack 79323 2 vials

RARγ Reporter Cellular Assay Pack 79324 2 vials

BPS Bioscience是一家通過ISO 9001:2015認證的生命科學領域的供應商，公司一直致力于開發藥物研發領域的重組蛋白酶、蛋白酶活性/抑制劑篩選試劑盒和慢病毒等工具。公司由Henry Zhu博士于2005年創立，從創立至今一直致力于提供藥物研發領域的創新解決方案，以推動新的藥物發現。公司主要關注的領域包括免疫療法、表觀遺傳學、新型冠狀病毒、CRISPR、細胞信號轉導等，主要提供激酶、磷酸二酯酶、磷酸酶、組蛋白去甲基化酶、組蛋白甲基化轉移酶、HDACs、聚ADP核糖聚合酶等。 

作為BPS Bioscience在中國的區域代理，艾美捷科技有限公司將為中國客戶提供全面的BPS Bioscience以及客戶訂制化服務。