Signal-Seeker 泛素化富集試劑盒(30次檢測)-輕松分析關鍵調控蛋白的修飾

Signal-Seeker? 產品系列的開發旨在讓專業人士和非專業人士都能輕松分析關鍵調控蛋白的修飾。全面的 Signal-Seeker? 試劑盒提供了一種親和珠子系統，用于從任何給定的細胞或組織裂解液中分離和富集修飾蛋白。隨后，通過標準的 Western blot 程序，使用針對目標蛋白的一抗來分析富集的蛋白群體。

艾美捷Signal-Seeker 泛素化富集試劑盒(30次檢測)（#BK161）用途包括：

研究瞬時調控機制  

測量多條信號通路成員蛋白的信號事件  

發現目標蛋白的新修飾  

洞察調控機制  

測量內源性或瞬時表達蛋白的信號事件   

實驗結果示例：

這些試劑盒有多種應用（見下一部分），這里我們描述了一個關于 Rac1 蛋白的有趣應用：

應用 1：研究高度瞬時的調控事件  

Rho 家族蛋白（包括 Rac1）的活性已知部分通過泛素化（也稱為泛素化修飾）事件進行調控，這些事件可以通過修飾蛋白的降解和/或定位來調節信號通路（Visvikis, O. 等人，2010. Biol. Cell 102: 377-389；Nethe, M. 和 Hordijik, P. 2010. J. Cell Sci. 123: 4011-4018）。在許多情況下，Rac1 的 GTP 結合活性形式是泛素化的首選底物。例如，研究表明，用細菌毒素 CNF1 處理的細胞會導致 Rac1 的持續激活以及隨后的單泛素化和多泛素化（Pop, M. 等人，2004. J. Biol. Chem. 279: 35840-35848）。

使用 Signal-Seeker? 泛素化檢測試劑盒（貨號：BK161），我們檢測了用 CNF1 毒素（貨號：CN04）處理的 3T3 細胞中內源性 Rac1 的泛素化，并發現在 300 ug 的 3T3 細胞裂解液中可以檢測到 Rac1 的單泛素化和多泛素化。該試劑盒提供了一種用戶友好的工具，用于檢測任何目標蛋白的單泛素化和多泛素化。

圖 1：Swiss 3T3 細胞預先用 MG-132 處理，然后未處理或用 CNF1（CN04）處理 3 小時，隨后用 BlastR 緩沖液裂解。利用 BK161 試劑盒對每種條件的 300 ?g 裂解液進行免疫沉淀（IP）。泳道 1：3 ?g 未處理裂解液輸入；泳道 2：泛素親和珠子（UBA01）+ 未處理裂解液；泳道 3：UBA01 + CN04 處理的裂解液；泳道 4：泛素對照珠子（CUB02）+ 未處理裂解液；泳道 5：CUB02 + CN04 處理的裂解液。使用抗 Rac1 抗體檢測 Rac1 的泛素化。

在這一研究領域可以嘗試的其他實驗包括：  

泛素化酶或去泛素化酶在 Rac1 單泛素化和多泛素化中的藥理學研究  

在多種不同的生長因子或藥物處理下，研究 Rac1 激活與泛素化之間的關系  

檢測泛素化 Rac1 與效應蛋白的相互作用  

檢測泛素化 Rac1 與其他 Rac1 調控性翻譯后修飾（PTMs）之間的相互作用  

相關產品  

Signal-Seeker? 磷酸酪氨酸檢測試劑盒（貨號：BK160）  

Signal-Seeker? SUMOylation 2/3 檢測試劑盒（貨號：BK162）  

Signal-Seeker?：BlastR? 快速裂解液制備試劑盒（貨號：BLR01）  

Signal-Seeker? 泛素親和珠子（貨號：UBA01B-beads）  

Signal-Seeker?：PTMtrue? 泛素抗體（貨號：AUB01）