ALPCO 小鼠IgG2c ELISA試劑盒樣本稀釋和試劑準備說明

IgG2c檢測試劑盒是一種高靈敏度的雙位點酶聯免疫測定法（ELISA），用于小鼠血漿和血清樣本中IgG2c的定量測定。僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品小鼠IgG2c ELISA試劑盒。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

小鼠IgG2c ELISA試劑盒檢測原理：

雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）的原理如圖1所示。在這個檢測中，樣本中存在的IgG2c與已經吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgG2c抗體發生反應。洗滌去除未結合的蛋白質后，加入與辣根過氧化物酶（HRP）結合的抗IgG2c抗體。這些酶標記的抗體與之前結合的IgG2c形成復合物。經過另一次洗滌步驟，通過添加顯色底物3,3',5,5'-四甲基聯苯胺（TMB）來檢測與免疫吸附劑結合的酶。結合酶的量與被測試樣本中IgG2c的濃度成正比；因此，450納米處的吸光度是測試樣本中IgG2c濃度的量度。測試樣本中的IgG2c量可以通過從標準品構建的標準曲線進行插值，并根據樣本稀釋進行校正。

未提供但必需的材料

精密移液管（2 ?L至1000 ?L）用于制作和分發稀釋液

試管

噴霧瓶或微孔板洗滌/抽吸器

蒸餾水或去離子水

微孔板讀數器

用于準備試劑和緩沖溶液的各種玻璃器皿

計時器

抗凝劑（用于血漿樣本收集）

離心機

樣本收集和處理

所有血液成分和生物材料應視為潛在危險物品。在處理和處置時遵循通用預防措施。

如果血液樣本出現凝血、嚴重溶血、脂血，或樣本的完整性受到關注，應做記錄并謹慎解釋結果。

下面列出的樣本收集和儲存條件是作為一般指導方針。樣本的穩定性尚未評估。

血清樣本：應通過靜脈穿刺收集血液。血液凝固后通過離心分離血清。移除血清并立即進行檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。

血漿樣本：應將血液收集到含有抗凝劑的容器中，然后進行離心。立即進行檢測或分裝后儲存于-80°C（最好）或-20°C。避免反復凍融循環。

已知干擾物質：疊氮化物和硫柳汞在高于0.1%的濃度下會抑制酶反應。

樣本稀釋

檢測要求在使用前對每個測試樣本進行稀釋。每次進行檢測時，所有樣本都應以雙份進行檢測。推薦的稀釋比例僅供參考。稀釋比例應基于未知樣本的預期濃度，以便稀釋后的樣本落在標準曲線的動態范圍內。如果不確定樣本值，在運行整個板之前，強烈建議對一個或兩個代表性樣本進行連續稀釋。

血清和血漿樣本 - 推薦的起始稀釋比例為1:5,000。要準備1:5,000的樣本稀釋液，將5 ?L的樣本轉移到495 ?L的1X稀釋液中。這會產生1:100的稀釋液。接下來，將1:100的稀釋液通過轉移10 ?L到490 ?L的1X稀釋液中進行稀釋。這會產生1:5,000的稀釋液。每個階段都要徹底混合。

試劑準備

使用前將所有試劑置于室溫（16°C至25°C）。

稀釋液濃縮液 - 提供的稀釋液是5倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:5稀釋（1份緩沖液濃縮液，4份dH2O）。

洗滌液濃縮液 - 提供的洗滌液是20倍濃縮液，必須用蒸餾水或去離子水按1:20稀釋（1份緩沖液濃縮液，19份dH2O）。當儲存溫度較低時，濃縮液中可能會形成結晶。在稀釋前將濃縮液加熱至30-35°C可以溶解結晶。

酶-抗體結合物 - 通過向每個微孔板測試條添加10 ?L酶-抗體結合物至990 ?L的1X稀釋液中，計算每個微孔板測試條所需的工作結合物溶液量。使用前立即稀釋，并避光。均勻混合，但要輕柔。避免起泡。

預涂層ELISA微孔板 - 按提供的狀態即開即用。揭開箔袋，從袋中取出板。移除在測定中不會使用的條和孔，放回袋中并重新密封，連同干燥劑。

小鼠IgG2c校準物 - 根據批次特定的分析證書準備。

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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