ALPCO 胰島素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)提供的物料和樣本收集方案

依賴胰島素的糖尿病（IDDM）或1型糖尿病是一種自身免疫性疾病，其中胰島素缺乏是胰腺β細胞免疫學破壞的結果。在遺傳上易患IDDM的個體中，對β細胞的免疫攻擊發生在無癥狀期（1），這被稱為“糖尿病前期”。研究表明，這種糖尿病前期通常在IDDM發病前幾年開始。在這個階段，許多糖尿病前期個體的血液中可以檢測到針對胰島細胞抗原（ICA）和/或胰島素（IAA）的自身抗體。目前用于測定人血清中IAA的最敏感方法采用放射測定競爭性測定（15）。這個試劑盒是一種用于IAA測定的酶聯免疫吸附測定（ELISA）。它使用簡單，不需要使用放射性材料。IAA旨在用于研究中，用于檢測針對人類胰島素的循環自身抗體。IAA ELISA檢測人胰島素特異性人IgG的存在。此套件僅供研究使用。不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品胰島素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

胰島素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)檢測原理：

人胰島素固定在微孔上。將參考、陽性和陰性對照以及稀釋的血清樣本添加到適當的微孔中。血清樣品和對照中的人IgG特異性抗體與微孔上的胰島素分子結合。在洗掉未反應的血清物質后，將酶（堿性磷酸酶）標記的人IgG特異性山羊抗體加入抗原-抗體復合物中。徹底洗滌以去除未結合的酶后，加入底物（PNPP）溶液，用分光光度法測量顯色。顏色的強度與樣品中IAA的濃度成正比。提供兩種質量控制（陽性和陰性）來監測和驗證檢測結果。

提供的物料：

1. PLA IAA = IAA微孔板條（帶支架），12條

2. CONJ ENZ 6X = IAA-IgG酶結合物（濃縮液），2 x 1.0 mL

3. DIL SPE 5X = IAA樣本稀釋液（濃縮液），1 x 25.0 mL

4. CONJ ENZ DIL = 結合物稀釋液，1 x 10.0 mL

5. CTRL REF IAA = IAA參考對照（人血清），1 x 1.5 mL

6. CRTL + IAA = IAA陽性對照（人血清），1 x 1.5 mL

7. CRTL- IAA = IAA陰性對照（人血清），1 x 1.5 mL

8. SUBS PNPP = 底物溶液（PNPP），1 x 15.0 mL

9. BUF WASH 25X = 洗滌緩沖液（濃縮液），1 x 20.0 mL

10. SOLN STP = 終止液（1N氫氧化鈉），1 x 6.0 mL

額外需要但未提供的物料：

1. 蒸餾水或去離子水

2. 吸水紙巾，用于洗滌后吸干條帶，以及在孵育期間覆蓋條帶的Parafilm/塑料薄膜

3. 適合血清稀釋的合適尺寸的玻璃管

4. 微量移液管和一次性吸頭，用于遞送10 ?L, 50 ?L, 100 ?L 和 1000 ?L

5. 微孔板洗滌器或擠壓瓶用于洗滌

6. 用于遞送結合物稀釋液的5 mL移液管

7. 500 mL量筒

8. 具有405 nm吸光度能力的微孔板讀數器

9. 塑料標簽膠帶，用于在檢測前封貼未使用的孔

樣本收集：

通過靜脈采血5-10 mL，放入凝血（紅色頂部）管中?？梢允褂醚宸蛛x器。通過離心分離血清。血清樣本可以存放在2-8°C。測試樣本中過多的溶血和大血塊或微生物生長的存在可能會干擾測試的性能。如果血清樣本在24小時內無法分析，請將其冷凍在-20°C。

試劑準備和儲存：

1. IAA-IgG酶結合物復溶：準確將5 mL的結合物稀釋液轉移到含有IAA-IgG酶結合物（濃縮液）的瓶中。關閉瓶蓋并通過倒置徹底混合。始終在2-8°C下儲存稀釋后的結合物。在標簽上記錄復溶日期。這種稀釋后的試劑在復溶后30天內有效。兩個結合物（濃縮液）瓶子中的每一個都足夠用于6條測試條。根據需要復溶。

2. IAA樣本稀釋液緩沖液：如果由于在較低溫度如2-8?C下儲存，樣本稀釋液濃縮液中出現沉淀，可以通過將小瓶放入37?C水浴中30分鐘來溶解。將全部內容物（25 mL）轉移到合適容器中的100 mL蒸餾水/去離子水中。徹底混合；將容器標記為IAA樣本稀釋液，并在2-8°C下儲存。稀釋后的試劑在小瓶上顯示的有效期前都是穩定的。

3. 洗滌溶液：如果由于在較低溫度如2-8°C下儲存，洗滌緩沖液濃縮液中出現結晶，可以通過將小瓶放入37?C水浴或培養箱中30分鐘來溶解。將全部內容物轉移到500 mL容器中的480 mL蒸餾水/去離子水中。徹底混合；將容器標記為洗滌，并在2-8°C下儲存。稀釋后的試劑在小瓶上顯示的有效期前都是穩定的。

4. 血清樣本準備：準確將10 ?L（0.010 mL）的血清樣本轉移到已經標記的玻璃管中的1.0 mL工作樣本稀釋液中。徹底混合。

文獻參考：

1. Eisenbarth, G.S., J. Connelly, and J.S. Soeldner (1987). The natural history of type Idiabetes. Diabet./Metab. Rev., 3:873-891.

2. Hirata, Y., H. Ishizu, N. Ouchi, S. Motomura, M. Abe, Y. Hara, H. Wakasugi, I. Takahashi,H. Sakano, M. Tanaka, H. Kawaao, and T. Kanesaki (1970). Insulin autoimmunity in acase with spontaneous hypoglycemia. Japan J. Diabet., 13:312-319.

3. Goldman, J., D. Baldwin, A.H. Rubenstein, D.D. Klink, W.G. Blackard, L.K. Fisher, T.F.Roe, and J.J. Schnure (1979). Characterization of circulating insulin and proinsulinbinding antibodies in autoimmune hypoglycemia. J. Clin. Invest., 63:1050-1059.

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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