ALPCO 谷氨酸脫羧酶(GAD) ELISA, 96孔微孔板專用，高效檢測解決方案

胰島素依賴型糖尿?。↖DDM），1型，是由胰腺β細胞的自身免疫性破壞引起的（1,2）。這種選擇性自身免疫性肝切除導致胰島素分泌完全消除。IDDM血清中特異性胰島細胞自身抗體的存在證明了免疫證據（3）。在1型糖尿病患者中，已經鑒定出至少三種針對胰島細胞抗原成分的自身抗體。這些自身抗體特異性地針對胰島細胞抗原成分（4）、谷氨酸脫羧酶（5）和胰島素（6）。谷氨酸脫羧酶（GAD）是神經遞質抑制劑γ-氨基丁酸（GABA）的生物合成酶（7）。兩種形式的GAD，6.5 KDa和67 KDa，由一個基因產生，高度同質（8-10）。在腦和胰島細胞中鑒定出65 KDa-GAD和67 KDa-GAD，在人類、大鼠和小鼠胰腺中差異表達（11,12）。GAD ELISA試劑盒是一種體外定性ELISA檢測方法，用于檢測谷氨酸脫羧酶（GAD）抗原的循環自身抗體。這個工具包僅供研究使用。它不用于診斷程序。

作為ALPCO在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦ALPCO熱銷產品谷氨酸脫羧酶(GAD) ELISA, 96孔。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

谷氨酸脫羧酶(GAD) ELISA, 96孔檢測原理：

純化的GAD抗原固定在微孔上。允許血清樣本中存在的GAD特異性IgG抗體與抗原反應。多余/未結合的血清蛋白從微孔中洗掉。一種酶（堿性磷酸酶）標記的山羊抗體，對人IgG具有特異性，被添加到GAD抗體復合物中。從微孔中洗掉多余的未反應的酶偶聯物后，加入底物（PNPP），用分光光度法測量產生的顏色。顏色的強度直接給出了測試血清樣本中GAD自身抗體的濃度。GAD陽性和陰性控制作為內部質量控制，以確保有效結果。

預防措施：

1. 不要冷凍測試試劑，始終將所有試劑盒組分存放在2-8°C的環境中。

2. 每次進行測試時，都必須運行陽性和陰性對照。

3. 只使用清晰的血清作為測試樣本。測試樣本不應有嚴重的渾濁、溶血或微生物污染。

4. 所有樣本都應進行雙重分析。

5. 不要混合不同批次的試劑。

6. 不要使用過期的試劑。

7. 不要讓試劑在室溫下長時間放置。

8. 不要讓底物溶液暴露在光線下。

9. 為了獲得可重復和準確的結果，需要精確的移液技術。

提供的物料：

1. PLA GAD = GAD-微孔板條（帶支架），12條

2. CONJ ENZ 6X = GAD-酶結合物（濃縮液），2 x 1.0 ml

3. DIL SPE 5X = 樣本稀釋液（濃縮液），1 x 25.0 ml

4. CONJ ENZ DIL = 結合物稀釋液，1 x 10.0 ml

5. CAL GAD CAL 1-3 = GAD-校準品（1,2,3）（人血清），1 x 1.5 ml

6. CTRL - GAD = GAD-陰性對照（人血清），1 x 1.5 ml

7. CTRL + GAD = GAD-陽性對照（人血清），1 x 1.5 ml

8. SUBS PNPP = 底物溶液（PNPP），1 x 15.0 ml

9. BUF WASH 25X = 洗滌緩沖液（濃縮液），1 x 20.0 ml

10. SOLN STP = 終止液（1N氫氧化鈉），1 x 6.0 ml

額外需要但未提供的物料：

1. 蒸餾水或去離子水。

2. 吸水紙巾，用于洗滌后吸干條帶，以及在孵育期間覆蓋條帶的Parafilm/塑料薄膜。

3. 適合血清稀釋的合適尺寸的玻璃管。

4. 微量移液管和一次性吸頭，用于遞送10 ?l、50 ?l和100 ?l。

5. 微孔板洗滌器或擠壓瓶用于洗滌。

6. 用于遞送結合物稀釋液的1-5 mL移液管。

7. 500 mL量筒。

8. 具有405 nm吸光度能力的微孔板讀數器。

9. 離心機。

10. 塑料標簽膠帶，用于在檢測前封貼未使用的孔。

11. 計時器

樣本收集：

通過靜脈采血5-10 ml，放入凝血（紅色頂部）管中?？梢允褂醚宸蛛x器。通過離心分離血清。血清樣本可以存放在2-8°C。測試樣本中過多的溶血和大血塊或微生物生長的存在可能會干擾測試的性能。如果血清樣本在24小時內無法分析，請將其冷凍在≤ -20°C。

文獻參考：

1. Cooke, A. (1990). An overview on the possible mechanism of destruction of theinsulin-producing beta cell. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 164:125-142.

2. Harrison, L.C., I.L. Campbell, P.G. Colman, et al (1990). Type 1 diabetes:Immunology andImmunotherapy. Adv. Endocrinol. Metab. 1:35-94.

3. Bottazzo, G.F., A. Florin-Christensen, and D.Doniach ( 1974). Islet cellantibodies in diabetes mellitus with autoimmune polyendocrine deficiencies.Lancet, ii:1279-1283. 

ALPCO產品種類多樣，可測樣品來源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、豬、羊、狗、猴等，涉及神經生物學、骨代謝、心血管疾病和氧化應激、細胞因子與信號轉導、糖尿病和肥胖癥、內分泌學、甲狀腺功能、腸胃病學、免疫學、生殖激素、抗體和抗原、分子診斷等多個研究領域，尤以糖尿病和肥胖癥研究領域見長。

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