山羊抗小鼠IgG2b重鏈抗體親和純化：即用型，配合二抗靈活構建檢測系統

一、產品概述

小鼠IgG亞型分為IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c及IgG3等，其中IgG2b在結構上具有獨特之處——其分子呈“T”形而非經典的“Y”形，這是由鏈內二硫鍵相互作用所致。本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對小鼠IgG2b重鏈的特異性山羊多克隆抗體（貨號：A90-109P）。該抗體經固相吸附和親和純化，以未標記完整IgG形式提供，適用于ELISA、免疫細胞化學（ICC）、免疫組織化學（IHC）和蛋白質印跡（WB）等應用。

二、核心規格參數

參數 詳細信息

靶標 小鼠IgG2b重鏈

反應性 小鼠

應用 ELISA， ICC， IHC， WB

宿主 山羊

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

亞型 IgG

標記 未偶聯

純度 抗原親和純化

抗原物種 小鼠

濃度 1 mg/ml

儲存溫度 2 – 8 °C

有效期 自收貨之日起2年

緩沖液 含0.09%疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖鹽水

三、生產與純化工藝

本抗體的生產采用固相吸附技術以確保亞類特異性。具體而言，抗血清經固相吸附處理，以去除與其他IgG亞類交叉反應的組分。隨后通過親和層析進行分離——將小鼠IgG2b抗原偶聯至瓊脂糖凝膠，抗體經過該親和柱后獲得高純度產物。免疫球蛋白濃度的測定依據比爾定律：1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。

四、特異性與交叉反應性

經免疫電泳和ELISA驗證，本抗體與小鼠IgG2b發生特異性反應。與小鼠IgA、IgM、IgG1、IgG2a、IgG2c、IgG3及IgE的交叉反應性均低于1%，顯示出極高的亞類特異性。

重要提示：部分雜交瘤克隆可能表達異常的免疫球蛋白相關肽段，這些異常產物可能被本抗體錯誤識別。使用者若檢測雜交瘤上清或腹水樣本，建議同時設置適當的陰性對照（如使用不相關的同型對照抗體或不表達IgG2b的親本細胞系上清）以排除假陽性。

五、推薦應用與稀釋度

以下稀釋度范圍供參考。請注意，并非所有列出的應用均經過實驗室的專門驗證，使用者需根據具體實驗條件進行優化。

酶聯免疫吸附測定（ELISA）

常規檢測：1:1,000 – 1:30,000

包被酶標板：1:100 – 1:500

在ELISA中，本抗體可作為捕獲抗體（包被）或檢測抗體（標記二抗后使用）。由于產品為未偶聯形式，用于檢測時需配合合適的酶標或熒光標記的二抗（如兔抗山羊IgG-HRP）。

免疫細胞化學（ICC）

推薦稀釋度：1:200 – 1:2,000

適用于培養細胞的固定和通透處理后的染色。建議使用含0.1% Triton X-100和適量正常血清的緩沖液進行封閉，以降低背景。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋度：1:200 – 1:2,000

適用于冷凍切片或石蠟切片。對于福爾馬林固定、石蠟包埋組織，建議根據組織類型優化抗原修復條件（如枸櫞酸鹽緩沖液pH 6.0或Tris-EDTA pH 9.0）。

蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋度：1:1,000 – 1:30,000

適用于還原或非還原條件下的SDS-PAGE。由于本抗體識別的是重鏈，在還原條件下可檢測到約55 kDa的條帶（小鼠IgG2b重鏈）；在非還原條件下檢測到的信號對應于完整IgG2b（約150 kDa）。建議設置陽性對照——純化的小鼠IgG2b蛋白或已知表達IgG2b的雜交瘤細胞裂解液。

六、儲存與穩定性

抗體應在2°C至8°C條件下儲存，切勿冷凍。反復凍融會導致抗體變性聚集，降低效價。自收貨之日起，在推薦的儲存條件下有效期為2年。緩沖液中含有0.09%的疊氮化鈉作為防腐劑。

注意事項：

疊氮化鈉會抑制過氧化物酶活性。若計劃將本抗體用于HRP標記二抗的檢測體系（如WB或ELISA中作為一抗使用后再加HRP標記的二抗），一般無需去除疊氮化鈉，因為本抗體本身不含HRP，且實驗中會經過多次洗滌。但若計劃將本抗體直接進行HRP標記，則需通過透析或脫鹽去除疊氮化鈉。

疊氮化鈉對細胞具有毒性，不適用于活細胞染色。