兔抗MOF/MYST1抗體親和純化，DNA損傷應答關鍵工具研究

一、產品概述

MOF（又稱MYST1或KAT8）是MYST家族組蛋白乙酰轉移酶的核心成員，特異性催化組蛋白H4第16位賴氨酸（H4K16）的乙?；揎?，并在DNA損傷應答中與ATM激酶相互作用。本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人MOF蛋白N端區域（第1至50位氨基酸）的兔多克隆抗體（貨號：A300-992A）。該抗體經抗原親和純化，以未標記完整IgG形式提供，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）檢測，反應性涵蓋人及小鼠樣本。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | MOF / MYST1 / KAT8

反應性 | 人，小鼠

應用 | IHC， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第1至50位氨基酸

亞型 | IgG

標記 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與表位定位

本抗體的免疫原對應人MOF/MYST1蛋白（UniProt ID: Q9H7Z6）第1至50位氨基酸之間的N端區域。參考序列登錄號為BAB13924.1，對應GeneID 84148（基因符號KAT8）。該N端區域在不同物種中相對保守，且不同于MYST家族其他成員（如TIP60、MOZ）的C端催化結構域，因此本抗體能夠特異識別MOF全長蛋白，同時避免與家族內其他乙酰轉移酶發生交叉反應。

四、生產與親和純化工藝

抗體采用固相載體上固定的MOF特異性N端表位進行親和純化。具體而言，將包含上述第1-50位氨基酸的重組肽段或合成多肽偶聯至親和基質，兔抗血清經該親和柱層析，獲得高純度、高特異性的多克隆抗體。免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定：1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。純化后的抗體保存在Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8）中，并添加0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

五、儲存與穩定性

抗體應在2°C至8°C條件下儲存，切勿冷凍。自收貨之日起，在推薦的儲存條件下有效期為1年。緩沖液中的疊氮化鈉可能會抑制過氧化物酶標記檢測體系，若計劃將本抗體用于HRP偶聯二抗的檢測系統（如WB或IHC中的信號放大），建議通過透析或脫鹽步驟去除疊氮化鈉，或選擇與疊氮化鈉兼容的檢測試劑。

六、應用指南與優化參數

以下稀釋度和操作條件基于產品驗證數據提供。所有蛋白質印跡實驗均需使用含5%脫脂奶粉的TBST作為封閉液及抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。對于不同實驗類型，需注意二抗的選擇差異。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋度：1:1,000 – 1:5,000

關鍵操作要點：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，必須進行抗原修復。

推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進行熱誘導抗原修復?？刹捎梦⒉t加熱至沸騰后維持10-20分鐘，或使用高壓鍋修復2-5分鐘。

修復后需自然冷卻至室溫，再用PBS洗滌，然后進行封閉和一抗孵育。

由于抗體未直接標記，需配合HRP或熒光標記的抗兔二抗進行檢測。

建議：初次使用本抗體進行IHC時，可從1:1,000稀釋度開始，根據信號強度和背景情況向上調整（最高至1:5,000）。設置已知陽性組織（如人睪丸、HeLa細胞異種移植瘤或小鼠腦組織）作為陽性對照，并省略一抗作為陰性對照。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 細胞裂解物總蛋白

操作流程要點：

1. 制備細胞裂解液（推薦使用非變性裂解緩沖液，如含蛋白酶抑制劑的RIPA或NP-40緩沖液）。

2. 取1 mg總蛋白裂解液，加入6 ?g本抗體。

3. 4°C旋轉孵育過夜，確?？乖?抗體充分結合。

4. 加入蛋白A瓊脂糖或磁珠（根據抗體宿主選擇兔特異性結合介質），繼續孵育2-4小時。

5. 洗滌沉淀復合物3-5次后，加入SDS-PAGE上樣緩沖液煮沸洗脫。

6. 洗脫產物進行WB檢測時，需使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體（而非識別重鏈的二抗），以避免免疫沉淀中抗體重鏈（約55 kDa）與MOF（約60 kDa）信號重疊。

重要提示：在IP后WB檢測的封閉緩沖液中，建議添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以進一步降低背景信號。