兔抗BAF57/SMARCE1抗體親和純化，輕鏈特異性二抗匹配，精準檢測

一、產品概述

BAF57（又稱SMARCE1）是SWI/SNF染色質重塑復合物的核心亞基，在雌激素受體介導的基因轉錄共激活中發揮關鍵作用。本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人BAF57/SMARCE1蛋白C端區域（第361至411位氨基酸）的兔多克隆抗體（貨號：A300-810A）。該抗體經抗原親和純化，以未標記完整IgG形式提供，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）檢測，反應性涵蓋人及小鼠樣本。

二、核心規格參數 

參數 | 詳細信息

靶標 | BAF57 / SMARCE1

反應性 | 人，小鼠

應用 | IHC， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第361位至C端（全長411位）

亞型 | IgG

標記 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與表位定位

本抗體的免疫原對應人BAF57/SMARCE1蛋白（UniProt ID: Q969G3）第361位至C端（第411位）之間的區域，具體表位位于第360位殘基與C端之間。參考序列登錄號為NP_003070.3，對應GeneID 6605。該C端區域在BAF57蛋白中相對保守，且不同于與其他SWI/SNF亞基相互作用的N端結構域，因此本抗體能夠特異識別BAF57全長蛋白，同時避免與復合物中其他組分發生交叉反應。

四、生產與親和純化工藝

抗體采用固相載體上固定的BAF57特異性表位進行親和純化。具體而言，將包含上述C端表位的抗原肽段偶聯至親和基質，兔抗血清經該親和柱層析，獲得高純度、高特異性的多克隆抗體。免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定：1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。純化后的抗體保存在Tris-檸檬酸/磷酸鹽緩沖液（pH 7-8）中，并添加0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

五、儲存與穩定性

抗體應在2°C至8°C條件下儲存，切勿冷凍。自收貨之日起，在推薦的儲存條件下有效期為1年。緩沖液中的疊氮化鈉可能會抑制過氧化物酶標記檢測體系，若計劃將本抗體用于HRP偶聯二抗的檢測系統（如WB或IHC中的信號放大），建議通過透析或脫鹽步驟去除疊氮化鈉，或選擇與疊氮化鈉兼容的檢測試劑。

六、應用指南與優化參數

以下稀釋度和操作條件基于產品驗證數據提供。所有蛋白質印跡實驗均需使用含5%脫脂奶粉的TBST作為封閉液及抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。對于不同實驗類型，需注意二抗的選擇差異。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋度：1:500 – 1:2,000

關鍵操作要點：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，必須進行抗原修復。

推薦使用枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復，可采用微波爐或高壓鍋加熱。

修復后需自然冷卻至室溫，再進行封閉和一抗孵育。

由于抗體未直接標記，需配合HRP或熒光標記的抗兔二抗進行檢測。

建議：初次使用本抗體進行IHC時，可從1:500稀釋度開始，根據信號強度和背景情況向上調整（最高至1:2,000）。設置已知陽性組織（如人乳腺癌或睪丸組織）作為陽性對照，并省略一抗作為陰性對照。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 細胞裂解物總蛋白

操作流程要點：

1. 制備細胞裂解液（推薦使用非變性裂解緩沖液，如含蛋白酶抑制劑的RIPA或NP-40緩沖液）。

2. 取1 mg總蛋白裂解液，加入6 ?g本抗體。

3. 4°C旋轉孵育過夜，確?？乖?抗體充分結合。

4. 加入蛋白A/G瓊脂糖或磁珠，繼續孵育2-4小時。

5. 洗滌沉淀復合物3-5次后，加入SDS-PAGE上樣緩沖液煮沸洗脫。

6. 洗脫產物進行WB檢測時，需使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體（而非識別重鏈的二抗），以避免免疫沉淀中抗體重鏈（約55 kDa）與BAF57（約57 kDa）信號重疊。

重要提示：在IP后WB檢測的封閉緩沖液中，建議添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以進一步降低背景信號。

蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋度：1:2,000 – 1:10,000

通用操作條件：

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（含0.1% Tween-20的TBS）。

一抗孵育：4°C過夜（推薦）或室溫2小時。

二抗：推薦使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）。

檢測：化學發光或顯色法均可。

樣本類型區分：

細胞裂解液WB：使用常規抗兔IgG二抗（識別重鏈和輕鏈）。

免疫沉淀后WB：必須使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉液中添加5%正常豬血清，以消除IP過程中抗體重鏈的干擾信號。

蛋白大?。築AF57的表觀分子量約為57 kDa。建議同時上樣陽性對照裂解液（如HeLa或293T細胞裂解液）以及分子量標記。