兔抗Matrin 3抗體親和純化，避免與核纖層等核基質交叉反應，確保核斑點染色特異

一、產品概述

Matrin 3是一種核基質蛋白，參與多種細胞過程：將缺陷RNA錨定于核基質從而滯留于核內、調控與核骨架/核基質附著區（MAR/SAR）鄰近基因的啟動子活性，同時也是NMDA受體激活后神經元細胞死亡通路中的主要PKA底物。本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人Matrin 3蛋白C端區域（第800至847位氨基酸）的兔多克隆抗體（貨號：A300-591A）。該抗體經抗原親和純化，以未標記完整IgG形式提供，濃度200 ?g/ml，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫組織化學-免疫熒光（IHC-IF）、免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）檢測，反應性涵蓋人及小鼠樣本。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | Matrin 3

反應性 | 人，小鼠

應用 | IHC， IHC-IF， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第797位至C端（全長847位）

亞型 | IgG

標記 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 200 ?g/ml

| 儲存溫度 | 2 – 8 °C |

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與表位定位

本抗體的免疫原對應人Matrin 3蛋白（UniProt ID: P43243）第797位至C端（第847位）之間的區域，具體表位位于第800位殘基與C端之間。參考序列登錄號為NP_061322.2，對應GeneID 9782。該C端區域在Matrin 3蛋白中相對獨特，與其他核基質蛋白（如核纖層蛋白、NuMA等）的同源性較低，因此本抗體能夠特異識別Matrin 3全長蛋白，同時避免與核內其他結構蛋白發生交叉反應。

四、生產與親和純化工藝

抗體采用固相載體上固定的Matrin 3特異性C端表位進行親和純化。將包含上述C端表位的重組肽段或合成多肽偶聯至親和基質，兔抗血清經該親和柱層析，獲得高純度、高特異性的多克隆抗體。免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定：1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。純化后抗體濃度為200 ?g/ml，保存在含0.1% BSA（作為穩定劑）和0.09%疊氮化鈉（防腐劑）的Tris緩沖鹽水中。

五、儲存與穩定性

抗體應在2°C至8°C條件下儲存，切勿冷凍。自收貨之日起，在推薦的儲存條件下有效期為1年。緩沖液中含有的0.1% BSA有助于防止抗體在低濃度下吸附于管壁，提高長期穩定性。疊氮化鈉的存在可能抑制過氧化物酶活性，若計劃將本抗體用于HRP標記二抗的檢測體系（如WB或IHC中的信號放大），一般無需去除，因為實驗中會經過多次洗滌；但若計劃對本抗體進行直接HRP標記，則需通過透析或脫鹽去除疊氮化鈉。

六、應用指南與優化參數

以下稀釋度和操作條件基于產品驗證數據提供。所有蛋白質印跡實驗均需使用含5%脫脂奶粉的TBST作為封閉液及抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。對于免疫沉淀后WB檢測，需特別注意二抗選擇。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋度：1:500 – 1:2,000

關鍵操作要點：

對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，必須進行抗原修復。

推薦使用枸櫞酸鹽緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復?？刹捎梦⒉t加熱至沸騰后維持10-15分鐘，或使用高壓鍋修復2-3分鐘。

修復后需自然冷卻至室溫，再用PBS洗滌，然后進行封閉（建議使用5%正常山羊血清或BSA）。

由于抗體未直接標記，需配合HRP或熒光標記的抗兔二抗進行檢測。

建議：初次使用本抗體進行IHC時，可從1:500稀釋度開始，根據信號強度和背景情況向上調整（最高至1:2,000）。設置已知陽性組織（如人腦、脊髓或多種癌細胞系異種移植瘤）作為陽性對照，并省略一抗作為陰性對照。

免疫組織化學-免疫熒光（IHC-IF）

推薦稀釋度：1:250 – 1:1,000

操作要點：

IHC-IF與IHC的差異在于檢測方式：使用熒光標記的抗兔二抗（如Alexa Fluor 488/594），避免使用DAB等顯色底物。

抗原修復條件同IHC（枸櫞酸鹽緩沖液pH 6.0）。

封閉后加入一抗（4°C過夜），洗滌后加入對應熒光二抗（室溫避光孵育1小時）。

最后使用含DAPI的封片劑進行核染色。

Matrin 3為核基質蛋白，預期在細胞核內呈網狀或點狀分布。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 細胞裂解物總蛋白

操作流程要點：

1. 制備細胞裂解液（推薦使用含蛋白酶抑制劑的非變性裂解緩沖液，如RIPA或NP-40緩沖液，但RIPA可能破壞某些蛋白相互作用，可嘗試溫和裂解液）。

2. 取1 mg總蛋白裂解液，加入6 ?g本抗體。

3. 4°C旋轉孵育過夜。

4. 加入蛋白A瓊脂糖或磁珠（兔特異性介質），繼續孵育2-4小時。

5. 用裂解液洗滌沉淀復合物3-5次。

6. 加入SDS-PAGE上樣緩沖液（含還原劑），煮沸5分鐘洗脫。

7. 洗脫產物進行WB檢測時，需使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體（而非識別重鏈的二抗），以避免免疫沉淀中抗體重鏈（約55 kDa）與Matrin 3（約95 kDa）信號重疊。

重要提示：在IP后WB檢測的封閉緩沖液中，建議添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以進一步降低背景信號。

蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋度：1:1,000 – 1:5,000

通用操作條件：

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（含0.1% Tween-20的TBS）。

一抗孵育：4°C過夜（推薦）或室溫2小時。

二抗使用：

細胞裂解液WB：使用常規山羊抗兔IgG（識別重鏈和輕鏈，貨號A120-101P）。

免疫沉淀后WB：必須使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉液中添加5%正常豬血清，以消除IP過程中抗體重鏈的干擾信號。

檢測：化學發光（ECL）檢測。

蛋白大?。篗atrin 3的表觀分子量約為95-100 kDa。建議同時上樣陽性對照裂解液（如HeLa、293T、Neuro2a或小鼠腦組織裂解液）以及預染分子量標記。在還原條件下，Matrin 3遷移速度略慢于100 kDa標記。