山羊抗小鼠IgM重鏈抗體親和純化，可作捕獲抗體或檢測抗體

產品概述

免疫球蛋白M（IgM）是機體在免疫應答中首先產生的抗體類別，在血清中含量較高，對早期抗感染防御至關重要。本文介紹的是由艾美捷Bethyl Laboratories推出的一款山羊抗小鼠IgM重鏈特異性抗體（貨號：A90-101P），經固相吸附和親和層析純化，適用于ELISA、免疫細胞化學（ICC）、免疫組織化學（IHC）和免疫印跡（WB）等多種檢測體系。

基本規格

抗體類型：山羊多克隆IgG，完整IgG形式，未偶聯。

特異性：針對小鼠IgM重鏈。通過免疫電泳和ELISA驗證，該抗體特異識別小鼠IgM，與小鼠IgG亞類及IgA的交叉反應可忽略不計。注意：本品可能與其他物種的IgM存在交叉反應，用戶需根據實驗體系驗證。

純化方式：抗血清經固相吸附確保類別特異性，再通過抗原偶聯瓊脂糖珠進行親和層析分離。該策略有效去除了與輕鏈或其他Ig類別反應的抗體。

濃度：1 mg/ml（測定方法：比爾定律，1 mg/mL IgG在A280nm處吸光度為 1.4）。

緩沖體系：磷酸鹽緩沖液（PBS），含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

儲存與穩定性：2-8°C保存，自收貨之日起穩定期2年。

推薦應用與條件

重要提示：以下部分應用未經過我方實驗室直接驗證，所列稀釋比為文獻報道或用戶反饋的參考范圍，建議用戶自行優化。

1. 酶聯免疫吸附測定（ELISA）

稀釋范圍：

檢測或二抗用途：1:1,000 至 1:30,000

包被酶標板（作為捕獲抗體）：1:100 至 1:500

適用場景：定量或半定量檢測小鼠IgM水平，可作為夾心ELISA的檢測抗體或直接包被抗體。

2. 免疫印跡（Western Blot，WB）

稀釋范圍：1:1,000 至 1:30,000

適用樣本：小鼠血清、細胞培養上清、B細胞裂解液或免疫沉淀后的樣本。由于IgM以五聚體形式存在（分子量約900 kDa），還原條件下可觀察到約75 kDa的重鏈條帶。

3. 免疫組織化學（IHC）與免疫細胞化學（ICC）

稀釋范圍：1:200 至 1:2,000

適用樣本：

IHC：小鼠組織冰凍切片或石蠟切片（需優化抗原修復條件）

ICC：培養的B細胞、漿細胞或轉染細胞

檢測建議：未偶聯抗體需配合合適的標記二抗（如HRP、熒光染料或生物素標記的抗山羊IgG）進行信號放大。

產品附加信息

重鏈特異性抗體的設計原理

常規抗Ig抗體可能同時識別重鏈和輕鏈。由于輕鏈在其他Ig類別（IgG、IgA、IgE）中廣泛存在，此類抗體無法區分Ig類型。本抗體通過以下設計實現重鏈特異性：

固相吸附：抗血清經過與其他小鼠Ig類別（如IgG、IgA）的結合位點吸附，去除交叉反應性。

親和純化：使用小鼠IgM重鏈偶聯的瓊脂糖珠特異性富集抗重鏈抗體，而非完整IgM分子，從而避免輕鏈反應性。

這一設計確?？贵w優先識別IgM特有的重鏈恒定區表位。

應用選擇指南

應用 | 推薦稀釋比 | 關鍵注意事項

ELISA（檢測） | 1:1000-1:30000 | 配合酶標抗山羊二抗使用

ELISA（包被） | 1:100-1:500 | 直接包被于高結合力板

WB | 1:1000-1:30000 | 還原條件檢測~75 kDa重鏈

IHC/ICC | 1:200-1:2000 | 需進行封閉和親和素/生物素阻斷（如適用）

與其他物種的交叉反應

產品說明指出“可能與其他物種的IgM存在交叉反應”。如計劃檢測非小鼠樣本（如大鼠、人、兔等），建議設置適當的陰性對照和陽性對照進行驗證?？梢酝ㄟ^預吸附或使用物種特異性封閉試劑降低背景。

技術建議與注意事項

疊氮化鈉的影響

緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉。若后續實驗涉及：

HRP檢測系統：疊氮化物會抑制HRP活性。在使用HRP標記二抗前，需通過充分洗滌（3次×5分鐘）去除疊氮化物。

細胞培養：疊氮化鈉對細胞有毒。若需將抗體加入活細胞培養體系，應使用不含疊氮化物的制劑。

長期儲存：疊氮化物可防止微生物污染，適合2-8°C保存。但如需進行標記（如生物素或熒光標記），建議先通過脫鹽或透析去除疊氮化物。

稀釋與保存建議

稀釋液：推薦使用含1% BSA或正常血清的PBS稀釋，以降低非特異性吸附。

工作液穩定性：稀釋后抗體建議現用現配，不宜長時間存放。

凍融：本品未經過反復凍融驗證，建議分裝保存于2-8°C，避免冷凍以防蛋白聚集。

特定應用的優化提示

Western Blot：

由于IgM五聚體在非還原條件下難以進入凝膠，務必使用還原條件（含DTT或β-巰基乙醇的樣品緩沖液）并煮沸變性。

建議使用PVDF膜而非硝酸纖維素膜，因PVDF對大分子量蛋白結合力更高。

轉膜條件：濕轉系統建議使用含0.02% SDS的轉移緩沖液，300 mA恒流轉膜2小時（對于900 kDa五聚體，需延長轉膜時間或降低凝膠濃度）。

免疫組織化學：

對于石蠟切片，可能需要進行抗原修復。推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）或Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進行熱修復。

內源性過氧化物酶阻斷：若使用HRP檢測系統，需用3% H?O?孵育10-15分鐘。

背景控制：加入與二抗同源的正常血清（如正常兔血清）進行封閉。

ELISA：

包被抗體稀釋液推薦使用碳酸鹽緩沖液（pH 9.6）以實現最佳吸附。

檢測靈敏度可通過生物素-鏈霉親和素系統放大信號。