兔抗Sin1抗體親和純化，同步支持IHC、IP、WB，覆蓋細胞定位與互作分析

產品概述

Sin1（應力激活MAP激酶相互作用蛋白1，又稱MAPKAP1）是mTORC2復合物的核心亞基，作為PDK2負責磷酸化Akt/PKB的Ser473位點，在細胞生長、代謝和存活調控中發揮關鍵作用。本文介紹的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗Sin1抗體，親和純化（貨號：A300-910A）是一款兔源多克隆抗體，特異性識別Sin1蛋白，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）等多種應用。

基本規格

抗體類型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶聯。

免疫原：對應人Sin1蛋白（應力激活MAP激酶相互作用蛋白1）第472位至C末端（第522位氨基酸）區域，參考序列NP_001006618.1（GeneID 79109）。具體表位位于第470位至C端之間。

純化方式：抗原親和純化——將特異性表位固定于固相載體，富集高特異性抗體。

濃度：1000 ?g/ml（測定方法：比爾定律，1 mg/mL IgG在A280nm處吸光度為1.4）。

緩沖體系：Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

儲存與穩定性：2-8°C保存，自收貨之日起穩定期1年。

反應種屬與特異性

已驗證反應種屬：人（Human）?？贵w識別表位位于Sin1蛋白第472位至C末端區域。建議用戶根據實驗需求驗證其他種屬的交叉反應性。

推薦應用與實驗條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

推薦稀釋比：1:2,000 至 1:10,000

通用WB操作要點：

封閉液和抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜（O/N）

二抗選擇：

細胞裂解液樣本：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（如A120-101P）

免疫沉淀后樣本：需使用HRP標記的抗兔IgG輕鏈特異性二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（如S100-020），以避免重鏈干擾

2. 免疫沉淀（IP）

用量：每毫克細胞裂解液蛋白使用6 ?g抗體

適用樣本：人源細胞或組織裂解液

注意事項：Sin1作為mTORC2復合物組分，IP時建議使用溫和裂解條件（如含CHAPS或NP-40的緩沖液）以維持蛋白復合物的完整性。

3. 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:1,000 至 1:5,000

抗原修復：對于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片，強烈推薦使用pH 6.0的檸檬酸緩沖液進行熱誘導抗原修復。

適用樣本：人源組織切片

Sin1（MAPKAP1）的生物學功能

Sin1（Gene Symbol: MAPKAP1，Gene ID: 79109，UniProt ID: Q9BPZ7）也被稱為TORC2亞基MAPKAP1，具有以下核心功能：

mTORC2復合物中的關鍵作用：

Sin1是mTORC2（雷帕霉素不敏感性復合物）的必需亞基，與rictor、mTOR、mLST8和Protor共同組成該復合物。

作為PDK2（磷脂酰肌醇依賴性蛋白激酶2），Sin1介導Akt/PKB在Ser473位點的磷酸化。該磷酸化是Akt完全活化的關鍵事件，對細胞存活、增殖和代謝調控至關重要。

Sin1通過結合rictor來維持mTORC2復合物的穩定性，缺失Sin1將導致mTORC2組裝失敗。

應激信號通路中的支架蛋白功能：

在細胞核中，Sin1可作為ATF-2與p38 MAPK之間的支架蛋白，促進p38誘導的ATF-2磷酸化，參與應激應答。

Sin1也與c-Jun N端激酶（JNK）形成復合物，類似地作為支架蛋白調節JNK信號通路。

該蛋白最初被鑒定為SAPK（應力激活蛋白激酶）相互作用蛋白，參與酵母SIN1同源物介導的應力應答。

其他別名：JC310、MEKK2相互作用蛋白1（MIP1）、mSIN1、Ras抑制劑MGC2745、SIN1b、SIN1g等。

IP后WB的檢測要點

進行免疫沉淀后的Western blot檢測時，必須使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP二抗（并添加5%正常豬血清）。這是因為IP過程中抗體的重鏈（約50 kDa）和輕鏈（約25 kDa）會隨目標蛋白一同被洗脫和變性。Sin1的分子量約為59 kDa（依據亞型不同有所差異），該區域可能與抗體重鏈信號重疊。使用輕鏈特異性二抗可有效避免這一問題。正常豬血清有助于降低非特異性背景。

亞型識別

Sin1存在多種亞型（如SIN1b、SIN1g），分子量略有差異（約55-60 kDa）。本抗體識別C末端區域（第472-522位），理論上可識別包含該表位的所有主要亞型。若在WB中觀察到多條條帶，可能對應于不同亞型或翻譯后修飾形式。