兔抗p300抗體親和純化，低背景捕獲內源性EP300

產品概述

p300（亦稱EP300或組蛋白乙酰轉移酶p300）是一種多功能轉錄共激活因子，具有組蛋白乙酰轉移酶（HAT）活性，在染色質重塑和基因轉錄調控中發揮核心作用。本文介紹的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗p300抗體親和純化，貨號A300-358A是一款兔源多克隆抗體，特異性識別p300蛋白，適用于染色質免疫沉淀（ChIP）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）等應用。

基本規格

抗體類型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶聯。

免疫原：對應人p300蛋白（E1A相關蛋白p300）第950至1000位氨基酸殘基區間，參考序列NP_001420.2（GeneID 2033）。

純化方式：抗原親和純化——將特異性表位固定于固相載體，富集高特異性抗體。

濃度：1000 ?g/ml（測定方法：比爾定律，1 mg/mL IgG在A280nm處吸光度為1.4）。

緩沖體系：Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

儲存與穩定性：2-8°C保存，自收貨之日起穩定期1年。

產地：美國。

反應種屬與特異性

已驗證反應種屬：人（Human）?？贵w識別表位位于p300蛋白第950-1000區域。需注意p300與CBP（CREB結合蛋白）具有序列同源性，建議用戶根據實驗需求驗證交叉反應性。

推薦應用與實驗條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

推薦稀釋比：1:10,000 至 1:25,000

凝膠建議：推薦使用3-8% Tris-醋酸酯凝膠，以有效分離分子量約300 kDa的p300蛋白。

通用WB操作要點：

封閉液和抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜（O/N）

二抗選擇：

細胞裂解液樣本：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（如A120-101P）

免疫沉淀后樣本：需使用HRP標記的抗兔IgG輕鏈特異性二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（如S100-020），以避免重鏈干擾

2. 免疫沉淀（IP）

用量：每毫克細胞裂解液蛋白使用6 ?g抗體

適用樣本：人源細胞或組織裂解液

3. 染色質免疫沉淀（ChIP）

推薦用量：10 ?g / 反應

參考方法：參考Ram O et al., Cell 2011 Dec 23;147(7):1628-39。此前批次的抗體已驗證可用于ChIP-seq實驗。

注意：ChIP實驗需根據特定樣本和實驗體系優化交聯、染色質片段化及抗體用量。建議設置陽性和陰性對照。

p300的生物學功能

p300（UniProt ID: Q09472）是一種組蛋白乙酰轉移酶，也稱為KAT3B。其功能包括：

組蛋白乙?；捍呋M蛋白乙?；?，松弛染色質結構，促進轉錄因子結合。

多種?；D移酶活性：除乙?；?，還具有組蛋白丁?；投辊；⒈；刃揎椆δ?。

轉錄共激活：結合磷酸化CREB，介導cAMP調控的基因表達；同時也是HIF1A（缺氧誘導因子1α）的共激活因子。

與病毒蛋白相互作用：通過結合E1A蛋白參與細胞轉化過程。

p300與CBP（CREB結合蛋白）高度同源，兩者在多種細胞過程中功能重疊但亦有差異。