兔抗Leo1抗體親和純化，助力表觀遺傳與RNA加工研究

產品概述

Leo1（RNA聚合酶相關蛋白LEO1）是PAF1/RNA聚合酶II復合物的核心組分，參與轉錄起始、延伸、組蛋白甲基化及RNA加工等多個關鍵環節。本文介紹的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗Leo1抗體親和純化（貨號：A300-175A）是一款兔源多克隆抗體，特異性識別Leo1蛋白，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）等應用，反應種屬包括小鼠和人。

基本規格

抗體類型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶聯。

免疫原：對應人Leo1蛋白（衰老下調leo1樣蛋白）第550至600位氨基酸殘基區間，參考TrEMBL條目Q8WVC0（GeneID 123169）。

純化方式：抗原親和純化——將特異性表位固定于固相載體，富集高特異性抗體。

濃度：1000 ?g/ml（測定方法：比爾定律，1 mg/mL IgG在A280nm處吸光度為1.4）。

緩沖體系：Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

儲存與穩定性：2-8°C保存，自收貨之日起穩定期1年。

反應種屬與特異性

已驗證反應種屬：小鼠（Mouse）和人（Human）?？贵w識別表位位于Leo1蛋白第550-600區域（C端附近）。建議用戶根據實驗需求驗證其他種屬（如大鼠、猴等）的交叉反應性。

推薦應用與實驗條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

推薦稀釋比：1:10,000 至 1:25,000

通用WB操作要點：

封閉液和抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜（O/N）

二抗選擇：

細胞裂解液樣本：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（如A120-101P）

免疫沉淀后樣本：需使用HRP標記的抗兔IgG輕鏈特異性二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（如S100-020），以避免重鏈干擾

預期條帶：Leo1的分子量約為70-80 kDa（具體因亞型和修飾而異）。

2. 免疫沉淀（IP）

用量：每毫克細胞裂解液蛋白使用6 ?g抗體

適用樣本：人或小鼠細胞裂解液

注意事項：Leo1作為PAF1復合物組分，IP時建議使用溫和裂解條件（如含NP-40或CHAPS的緩沖液）以維持蛋白復合物的完整性?？山Y合CDC73、PAF1或CTR9抗體的共沉淀實驗驗證復合物相互作用。

3. 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:2,000 至 1:10,000

抗原修復：對于福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片，強烈推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進行熱誘導抗原修復。

適用樣本：人或小鼠組織切片

Leo1（LEO1）的生物學功能

Leo1（Gene Symbol: LEO1，Gene ID: 123169，UniProt ID: Q8WVC0）也稱為RNA聚合酶相關蛋白LEO1，是PAF1/RNA聚合酶II復合物的關鍵組分。

PAF1復合物的組成：

該復合物在真核生物中高度保守，至少包含以下核心亞基：Leo1、CDC73、PAF1和CTR9。部分物種中還包含其他輔助亞基。

主要功能：

轉錄調控：PAF1復合物與RNA聚合酶II直接結合，在轉錄起始和延伸階段發揮調控作用。它促進RNA聚合酶II從啟動子區域向基因編碼區的有效過渡。

組蛋白修飾：該復合物參與介導多種組蛋白修飾，包括H3K4甲基化、H3K36甲基化以及H2B單泛素化，這些修飾與轉錄延伸和染色質結構動態變化密切相關。

RNA加工：PAF1復合物還參與共轉錄RNA加工事件，包括mRNA加帽、剪接和多聚腺苷酸化。

衰老相關性：Leo1最初被鑒定為復制性衰老下調基因（RDL，replicative senescence down-regulated），其表達水平在細胞衰老過程中降低，提示其在細胞增殖和衰老調控中具有潛在作用。

其他別名：RDL、復制性衰老下調leo1樣蛋白。

技術建議與注意事項

稀釋優化

WB推薦的1:10,000-1:25,000為極寬的稀釋范圍，反映出該抗體對Leo1的高親和力。建議從1:10,000開始進行梯度稀釋測試，根據信號強度和背景優化最佳工作濃度。高稀釋比有助于降低非特異性條帶。

IHC抗原修復條件

本抗體與常規IHC修復條件（檸檬酸緩沖液pH 6.0）不同，專門推薦使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）。操作要點：

修復液：10 mM Tris堿，1 mM EDTA，0.05% Tween 20，pH 9.0

修復方式：微波爐高火煮沸后轉低火15-20分鐘，或使用高壓鍋修復2-3分鐘

冷卻：室溫自然冷卻20-30分鐘，然后用PBS洗滌

使用錯誤修復液可能導致信號減弱或背景增高。