兔抗Pumilio 2抗體親和純化，高效翻譯調控研究工具

產品概述

Pumilio 2（PUM2）是一種生殖細胞特異性RNA結合蛋白，通過識別靶mRNA的3’非翻譯區（3’ UTR）元件實現翻譯調控，在生殖細胞維持和發育中發揮關鍵作用。本文介紹的由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗Pumilio 2抗體親和純化（貨號：A300-202A）是一款兔源多克隆抗體，特異性識別Pumilio 2蛋白，適用于免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）應用，反應種屬包括小鼠和人。

基本規格

抗體類型：兔多克隆IgG，完整IgG形式，未偶聯。

免疫原：對應人Pumilio 2蛋白第100至150位氨基酸殘基區間，參考序列NP_056132.1（GeneID 23369）。

純化方式：抗原親和純化——將特異性表位固定于固相載體，富集高特異性抗體。

濃度：1000 ?g/ml（測定方法：比爾定律，1 mg/mL IgG在A280nm處吸光度為1.4）。

緩沖體系：Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。

儲存與穩定性：2-8°C保存，自收貨之日起穩定期1年。

反應種屬與特異性

已驗證反應種屬：小鼠（Mouse）和人（Human）。抗體識別表位位于Pumilio 2蛋白第100-150區域（N端附近）。Pumilio 2與Pumilio 1具有高度同源性，建議用戶根據實驗需求驗證是否存在交叉反應，可通過敲除/敲低樣本或肽阻斷實驗確認。

推薦應用與實驗條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

推薦稀釋比：1:1,000 至 1:2,000

通用WB操作要點：

封閉液和抗體稀釋液：5%脫脂牛奶-TBST

一抗孵育：過夜（O/N）

二抗選擇：

細胞裂解液樣本：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體（如A120-101P）

免疫沉淀后樣本：需使用HRP標記的抗兔IgG輕鏈特異性二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（如S100-020），以避免重鏈干擾

預期條帶：Pumilio 2的分子量約為120 kDa（具體因亞型和翻譯后修飾而異）。由于Pumilio 2在生殖細胞中高表達，在體細胞中表達水平較低，建議使用睪丸、卵巢或生殖細胞系（如GC-1、GC-2）裂解液作為陽性對照。

2. 免疫沉淀（IP）

用量：每毫克細胞裂解液蛋白使用6 ?g抗體

適用樣本：人或小鼠細胞或組織裂解液（推薦使用生殖組織或生殖細胞系）

注意事項：Pumilio 2作為RNA結合蛋白，其與靶mRNA的相互作用依賴于RNA。若研究蛋白-蛋白互作，建議添加RNase抑制劑（如RNase OUT）或進行RNase處理以區分RNA介導的間接結合。若研究RNA結合功能，需使用RNA免疫沉淀（RIP）或CLIP-seq實驗體系，此抗體未經RIP驗證，用戶需自行優化。

Pumilio 2（PUM2）的生物學功能

Pumilio 2（Gene Symbol: PUM2，Gene ID: 23369，UniProt ID: Q8TB72）也稱為Pumilio同源物2，是進化上高度保守的PUF家族RNA結合蛋白成員。

主要功能：

翻譯調控：Pumilio 2通過其C端RNA結合結構域特異性識別靶mRNA 3’ UTR中的Pumilio響應元件（PRE，通常為UGUANAUA），抑制翻譯或促進mRNA降解。

生殖細胞維持：Pumilio 2在生殖細胞中特異性高表達，與同源蛋白Pumilio 1共同參與原始生殖細胞的形成、自我更新和分化。敲除Pumilio 2的小鼠表現為生殖細胞發育異常。

蛋白相互作用：Pumilio 2已被證明與DAZL（生殖細胞發育必需的RNA結合蛋白）相互作用，協同調控生殖細胞中特定mRNA的翻譯。此外，Pumilio 2也可能與CNOT復合物（CCR4-NOT去腺苷酸化酶復合物）相互作用，介導mRNA降解。

表達特征：Pumilio 2在成年小鼠的睪丸、卵巢中高表達，在胚胎生殖細胞中亦可檢測到。在體細胞中表達水平極低或不表達。因此，選擇適當的陽性對照是實驗成功的關鍵。

其他別名：PUMH2、pumilio-2、PUML2。

樣本制備注意事項

裂解液配方：RIPA緩沖液（50 mM Tris pH 7.5，150 mM NaCl，1% NP-40，0.5%脫氧膽酸鈉，0.1% SDS）適用于WB和IP。若需保留RNA結合，使用不含SDS的NP-40裂解液，并添加RNase抑制劑（40 U/ml）。

蛋白酶抑制：Pumilio 2易受蛋白酶降解，務必在裂解液中添加新鮮蛋白酶抑制劑混合物（如PMSF、亮肽素、抑肽素）。

樣本保存：裂解液建議分裝后-80°C保存，避免反復凍融。

總結

A300-202A是一款抗原親和純化的兔抗Pumilio 2多克隆抗體，濃度為1000 ?g/ml，適用于小鼠和人源樣本的IP和WB檢測。其識別表位位于Pumilio 2蛋白第100-150區域。WB推薦稀釋比為1:1,000-1:2,000，建議使用睪丸或生殖細胞系裂解液作為陽性對照；IP推薦用量為6 ?g/mg裂解液。抗體儲存于含疊氮化鈉的Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液（pH 7-8）中，2-8°C下可穩定保存一年。該抗體是研究生殖細胞發育、RNA翻譯調控以及Pumilio-DAZL信號軸的重要工具。用戶在IP后WB檢測時應使用輕鏈特異性二抗并添加豬血清封閉，以優化信號質量。對于RIP等RNA相關應用，需自行驗證抗體兼容性并添加RNase抑制劑。