驢抗山羊IgG（H+L）HRP偶聯物，信號放大能力提升2倍，不漏檢任何類別的山羊一抗

一、產品概述

在免疫檢測實驗中，酶標記的二抗是實現信號放大的關鍵工具。本文介紹一款驢抗山羊IgG（重鏈和輕鏈）多克隆抗體，其已與辣根過氧化物酶（HRP）共價偶聯，可直接用于檢測山羊來源的一抗。由艾美捷Bethyl Laboratories推出的該抗體（貨號：A50-101P）經抗原親和純化，以完整IgG形式提供，濃度1 mg/ml，適用于ELISA、免疫細胞化學（ICC）、免疫組織化學（IHC）和蛋白質印跡（WB）等多種應用。其識別山羊IgG的重鏈和輕鏈，即能夠結合完整IgG分子的所有部分，具有更高的檢測靈敏度，但需注意可能存在一定程度的種屬交叉反應。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | 山羊IgG重鏈和輕鏈

反應性 | 山羊

應用 | ELISA， ICC， IHC， WB

宿主 | 驢

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

亞型 | IgG

標記 | 辣根過氧化物酶（HRP）

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 山羊

濃度 | 1 mg/ml

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | 含0.05% Pro-Clean 400的磷酸鹽緩沖鹽水

三、生產與標記工藝

本抗體采用親和層析技術進行純化：將山羊IgG抗原偶聯至瓊脂糖凝膠，驢抗血清經過該親和柱后，高特異性的抗山羊IgG抗體被吸附，隨后洗脫收集。純化后的抗體與辣根過氧化物酶進行共價偶聯。偶聯前，免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm的吸光度為1.4）。酶與抗體的摩爾比為4:1，即每個抗體分子平均連接4個HRP分子。這一標記比例既保證了較高的酶活性，又避免了過度標記導致的抗體結合能力下降。純化后抗體保存在含0.05% Pro-Clean 400（一種防腐劑，不含疊氮化鈉，對HRP活性無抑制）的磷酸鹽緩沖鹽水中。

四、特異性與交叉反應性

經免疫電泳和ELISA驗證，本抗體與山羊IgG及與其他山羊免疫球蛋白共同的輕鏈發生特異性反應。未檢測到針對非免疫球蛋白血清蛋白的抗體，表明純化質量高。

需要注意：

由于本抗體識別輕鏈（κ和λ），而輕鏈存在于所有類型的免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM、IgE等）中，因此該抗體不僅能檢測山羊IgG，也可能檢測其他山羊免疫球蛋白亞型。這在大多數實驗中是可接受的，甚至有助于檢測總免疫球蛋白。本抗體可能與其他物種的IgG發生交叉反應，尤其親緣關系較近的物種（如綿羊、牛等）。使用者應根據樣本來源評估背景信號，必要時設置適當的陰性對照。

五、儲存與穩定性

抗體應在2°C至8°C條件下儲存，切勿冷凍。冷凍會導致HRP失活及抗體聚集。自收貨之日起，在推薦的儲存條件下有效期為1年。緩沖液中不含疊氮化鈉（Pro-Clean 400替代），因此不會抑制HRP活性，可直接用于需要酶活性的檢測體系。

六、應用指南與優化參數

以下稀釋度范圍供參考。請注意，并非所有列出的應用均經過實驗室的專門驗證，使用者需根據具體實驗條件進行優化。

酶聯免疫吸附測定（ELISA）

推薦稀釋度：1:10,000 – 1:100,000

操作要點：

本抗體可作為檢測抗體，用于間接ELISA中檢測已結合的山羊一抗。

稀釋液推薦使用含0.05% Tween-20和1% BSA或脫脂奶粉的PBS。

顯色底物：TMB（3,3‘,5,5’-四甲基聯苯胺）或OPD（鄰苯二胺）。加入底物后避光孵育15-30分鐘，用終止液（如2M H2SO4）終止反應，讀取450 nm或492 nm吸光度。

高稀釋度優勢：起始稀釋度高達1:10,000，可有效降低背景，節省抗體用量。

免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋度：1:50 – 1:500

適用樣本：

福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片

新鮮冷凍組織切片

固定或未固定的細胞爬片

操作要點：

1. 脫蠟、水化（FFPE切片）后，進行抗原修復（根據一抗要求選擇枸櫞酸鹽緩沖液pH 6.0或Tris-EDTA pH 9.0）。

2. 使用3% H2O2孵育10-15分鐘，以滅活內源性過氧化物酶。

3. 封閉：使用5%正常驢血清或5% BSA封閉非特異性位點。

4. 孵育山羊來源的一抗（按一抗推薦條件）。

5. 洗滌后，加入本抗體（按推薦稀釋度，通常1:100-1:500），室溫孵育30-60分鐘。

6. 洗滌后，加入DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時間。

7. 復染、脫水、封片。

建議：初次使用可從1:200開始，根據信號強度和背景調整。