兔抗GST標簽抗體親和純化，增強溶解性標簽專用抗體

一、產品概述

谷胱甘肽S-轉移酶（GST）標簽是一種常用的蛋白融合標簽，因其對谷胱甘肽的高度親和力而廣泛應用于重組蛋白的親和純化。GST標簽的分子量較大（約26 kDa），與許多小分子標簽（如His、FLAG、HA等）相比，具有提高融合蛋白溶解性的獨特優勢。此外，GST標簽可通過蛋白酶切割去除，靈活性高。本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對日本血吸蟲（Schistosoma japonicum）來源GST標簽的兔多克隆抗體（貨號：A190-122A）。該抗體經抗原親和純化，以未標記完整IgG形式提供，濃度1 mg/ml，適用于ELISA、免疫細胞化學（ICC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）檢測，可識別GST標簽融合蛋白。

二、核心規格參數

參數 | 詳細信息

靶標 | GST標簽（日本血吸蟲來源）

應用 | ELISA， ICC， IP， WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

亞型 | IgG

標記 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

濃度 | 1 mg/ml

儲存溫度 | 2 – 8 °C

有效期 | 自收貨之日起1年

緩沖液 | 含0.09%疊氮化鈉的磷酸鹽緩沖鹽水

三、免疫原與生產

本抗體通過免疫兔產生，免疫原為日本血吸蟲來源的谷胱甘肽S-轉移酶（GST）。由于GST標簽在多種商品化表達載體（如pGEX系列）中廣泛使用，該抗體可識別絕大多數GST融合蛋白?？贵w采用親和層析純化：將GST蛋白偶聯至固相載體，兔抗血清經過親和柱后，高特異性的抗GST抗體被吸附，隨后洗脫收集。免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定：1 mg/ml IgG在280 nm波長處的吸光度為1.4。純化后抗體保存在含0.09%疊氮化鈉的PBS中。

四、儲存與穩定性

抗體應在2°C至8°C條件下儲存，切勿冷凍。自收貨之日起，在推薦的儲存條件下有效期為1年。緩沖液中的疊氮化鈉會抑制過氧化物酶活性，若計劃將本抗體用于HRP標記二抗的檢測體系（常規WB/IHC），一般無需處理，因為實驗中會經過多次洗滌；但如果計劃對本抗體進行直接HRP標記，需通過透析或脫鹽去除疊氮化鈉。

五、應用指南與優化參數

以下稀釋度和操作條件基于產品驗證數據提供。所有蛋白質印跡實驗均使用含5%脫脂奶粉的TBST作為封閉液及抗體稀釋液，一抗孵育條件為4°C過夜。對于不同實驗類型，需注意樣本性質及二抗選擇。

酶聯免疫吸附測定（ELISA）

推薦稀釋度：

常規檢測（作為一抗）：1:1,000 – 1:30,000

包被酶標板（作為捕獲抗體）：1:100 – 1:500

操作要點：

本抗體可用于檢測經GST標簽純化或直接包被的GST融合蛋白。

由于抗體未標記，需配合HRP標記的抗兔二抗進行檢測。

推薦使用含0.05% Tween-20和1% BSA的PBS作為稀釋液和洗滌液。

免疫細胞化學（ICC）

推薦稀釋度：1:100 – 1:400

操作要點：

適用于表達GST融合蛋白的細胞（如轉染后的哺乳動物細胞或細菌涂片）。

細胞固定（4%多聚甲醛）和通透（0.1% Triton X-100）后，使用5%正常山羊血清封閉。

一抗稀釋至工作濃度，4°C孵育過夜。

洗滌后加入熒光或HRP標記的抗兔二抗進行檢測。

GST標簽較大（~26 kDa），可能影響融合蛋白的亞細胞定位，建議同時使用標簽特異性抗體和目的蛋白抗體進行共定位驗證。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：1 – 4 ?g 抗體 / mg 細胞裂解物總蛋白

操作流程：

1. 制備表達GST融合蛋白的細胞裂解液（建議使用非變性裂解緩沖液，以保持GST標簽的天然構象）。

2. 取1 mg總蛋白裂解液，加入1-4 ?g本抗體（具體用量取決于融合蛋白的表達豐度，初次實驗可從2 ?g開始）。

3. 4°C旋轉孵育過夜。

4. 加入蛋白A瓊脂糖或磁珠，繼續孵育2-4小時。

5. 用裂解液洗滌沉淀復合物3-5次。

6. 加入含還原劑的SDS-PAGE上樣緩沖液，煮沸洗脫。

7. 洗脫產物進行WB檢測時，建議使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體（并在封閉液中添加5%正常豬血清），以避免免疫沉淀中抗體重鏈（~55 kDa）與目標融合蛋白信號重疊。如果目標融合蛋白分子量遠大于55 kDa（如大于70 kDa），也可使用常規抗兔二抗。

蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋度：1:1,000 – 1:30,000

通用操作條件：

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（含0.1% Tween-20的TBS）。

一抗孵育：4°C過夜。

二抗：使用常規山羊抗兔IgG（識別重鏈和輕鏈，貨號A120-101P）。

檢測：ECL化學發光。

蛋白大?。篏ST標簽本身約26 kDa。融合蛋白的預期分子量 = 目的蛋白分子量 + 26 kDa。建議使用陽性對照——純化的GST蛋白或已知表達的GST融合蛋白裂解液。

注意：GST融合蛋白在SDS-PAGE中有時會出現降解產物或二聚體，抗體可能檢測到多條帶。建議使用新鮮制備的裂解液并添加蛋白酶抑制劑。