兔抗WDR5抗體親和純化，雙平臺驗證，簡化表觀遺傳復合物分析

一、產品概述

本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人WDR5（WD重復結構域蛋白5）的兔多克隆抗體（貨號：A302-429A）。該抗體特異性識別WDR5蛋白第1–50位氨基酸之間的N端表位，經抗原親和純化后以完整IgG形式提供，未偶聯標記物。已驗證反應種屬為人，推薦應用于免疫組織化學（IHC）及免疫沉淀（IP）。

WDR5是組蛋白H3賴氨酸4甲基轉移酶復合物（MLL和SET1復合物）的核心亞基，通過介導蛋白質相互作用參與染色質修飾與基因轉錄調控?？煽康奶禺愋钥贵w對于研究表觀遺傳調控機制及藥物靶點驗證具有重要意義。

二、詳細規格參數

參數 | 信息

靶標 | WDR5（WD repeat domain 5）

反應種屬 | 人

應用 | IHC, IP

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第1–50位氨基酸之間的區域

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

免疫原種屬 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

存儲條件 | 2–8 °C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、抗原表位與生產信息

該抗體識別的人WDR5表位位于第1–50殘基之間的N端區域，參考序列號為NP_060058.1（GeneID 11091）。免疫原對應此N端區段。

純化工藝采用固相載體固定的表位特異性親和層析，僅富集針對該N端表位的高親和力IgG分子，有效降低非特異性背景。由于WDR5含有7個WD重復結構域（該結構域在多種蛋白質中保守），選擇N端獨特區域作為免疫原顯著減少了與其它WD重復蛋白的交叉反應。

免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處的吸光度為1.4）。

四、應用方法與推薦條件

4.1 免疫組織化學（IHC）

推薦稀釋比：1:500 至 1:2000

抗原修復：建議使用Tris-EDTA緩沖液（pH 9.0）進行熱誘導表位修復（HIER）。可采用高壓鍋或微波加熱法，確保修復溫度達到95–100°C持續10–20分鐘。

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）的人組織切片。

檢測步驟建議：

1. 脫蠟水化后，使用3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶。

2. 抗原修復后，以5%正常山羊血清封閉30分鐘。

3. 一抗4°C孵育過夜或室溫孵育1–2小時。

4. 使用HRP標記的二抗及DAB顯色系統檢測。

對照設置：

陽性對照：推薦使用已知WDR5高表達的人組織（如睪丸、胚胎腎或多種癌細胞系來源的組織芯片）。

陰性對照：使用同型IgG或未免疫兔血清替代一抗。

4.2 免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 蛋白裂解液

根據抗體濃度1000 ?g/ml換算，6 ?g對應6 ?l抗體。操作流程如下：

1. 裂解細胞：使用非變性裂解緩沖液（如含0.5% NP-40的TBS或PBS，添加蛋白酶抑制劑）。

2. 預清除：裂解液與10 ?l蛋白A/G瓊脂糖珠及1 ?g同型IgG孵育1小時，離心去除非特異性結合物。

3. 免疫沉淀：預清除后的上清中加入6 ?g A302-429A抗體，4°C旋轉孵育2小時或過夜。

4. 捕獲：加入20–30 ?l蛋白A/G珠，繼續孵育1–2小時。

5. 洗滌：使用裂解緩沖液洗滌珠子3–5次。

6. 洗脫：加入2× SDS上樣緩沖液，煮沸5分鐘，離心后取上清進行WB檢測。

WB檢測IP產物的特殊注意事項：

生產說明書指出，免疫沉淀產物的Western Blot檢測應使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）。這一措施避免二抗與IP一抗的重鏈（約55 kDa）結合產生干擾條帶，確保清晰檢測目標蛋白（WDR5分子量約36 kDa）。

4.3 關于Western Blot的說明

雖然產品說明書中包含WB通用操作描述（5%牛奶-TBST，一抗過夜），但該抗體在應用的官方列表中僅包含IHC和IP。用戶若嘗試用于WB，需自行驗證。根據經驗，WDR5分子量約36 kDa，若需WB檢測，建議從1:500稀釋比開始，并設置過表達或敲低樣本作為對照。

五、儲存與穩定性

未稀釋抗體必須儲存于2–8°C，嚴禁冷凍。冷凍會導致IgG聚集和活性喪失。在推薦條件下，自收貨之日起可穩定保存1年。

緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉作為防腐劑。若用于IHC或IP，疊氮化鈉不影響實驗，但若需將IP產物用于后續質譜或細胞功能實驗，建議通過脫鹽柱去除。分裝建議：無需分裝，直接使用原液即可；若頻繁取用，確保操作無菌。