兔抗Nanog抗體親和純化：適用于小鼠樣本WB的可靠檢測方案

一、產品概述

本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對小鼠Nanog蛋白的兔多克隆抗體(貨號：A300-398A)。該抗體特異性識別Nanog蛋白第255位至C端（第305位）之間的表位，經抗原親和純化后以完整IgG形式提供，未偶聯任何標記物。已驗證反應種屬為小鼠，推薦應用于Western Blot（WB）檢測。

Nanog是一種同源盒轉錄因子，在胚胎干細胞（ES細胞）自我更新維持及分化延遲中發揮核心調控作用?？煽康奶禺愋钥贵w是研究多能性維持機制、干細胞分化軌跡及重編程效率的關鍵工具。

二、詳細規格參數

參數 | 信息

靶標 | Nanog（Nanog homeobox）

反應種屬 | 小鼠

應用 | WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第255位至C端之間

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

免疫原種屬 | 小鼠

濃度 | 1000 ?g/ml

存儲條件 | 2–8 °C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、抗原表位與生產信息

該抗體識別的小鼠Nanog表位位于第255–305殘基之間，參考序列號為TrEMBL Q80Z64（GeneID 71950）。免疫原對應第255位至C端區域。

純化工藝采用固相載體固定的表位特異性親和層析，僅富集針對該表位的高親和力IgG分子，有效降低非特異性背景。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處的吸光度為1.4）。

關鍵提示：Nanog同源盒區域位于約第95–154位氨基酸，本抗體的識別表位位于C端（255–305），遠離DNA結合結構域。這一設計避免了因同源盒高度保守導致的潛在交叉反應，但對Nanog截短突變體（如缺失C端的變體）可能無法識別。

四、應用方法與推薦條件

4.1 免疫印跡（WB）

推薦稀釋比：1:2000 至 1:10,000

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育：4°C過夜

檢測二抗：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）HRP偶聯抗體（貨號A120-101P）

樣品制備建議：

Nanog分子量約35–42 kDa（受翻譯后修飾影響），建議使用10–12% SDS-PAGE或4–12%梯度凝膠。

使用小鼠胚胎干細胞（如R1、E14、CGR8）裂解液作為陽性對照。分化的細胞（如添加LIF撤除處理3–5天）中Nanog表達顯著下降，可作為陰性對照驗證。

推薦上樣量：20–30 ?g總蛋白/泳道。

轉印與曝光：

轉膜可使用PVDF膜（預先甲醇活化）或硝酸纖維素膜。

建議使用ECL化學發光底物，曝光時間從30秒至5分鐘進行調整。Nanog在未分化ES細胞中豐度適中，通常可獲得清晰條帶。

4.2 重要說明

本抗體未驗證用于免疫沉淀（IP）、免疫熒光（IF）或免疫組化（IHC）。如需這些應用，建議自行測試或選擇其他驗證過的產品。所有WB實驗均需設立內參對照（如GAPDH、β-actin或Histone H3），以校正上樣量差異。

五、儲存與穩定性

未稀釋抗體必須儲存于2–8°C，嚴禁冷凍。冷凍會導致IgG聚集和活性喪失。在推薦條件下，自收貨之日起可穩定保存1年。

緩沖液中含有0.09%疊氮化鈉作為防腐劑，可抑制微生物污染。若后續實驗中需進行細胞培養或涉及體內注射，請通過脫鹽柱或透析去除疊氮化鈉。分裝建議：若需頻繁取用，可在無菌條件下將抗體分裝至低蛋白吸附管中，但分裝后仍需冷藏，不可凍存。

六、Nanog功能背景與研究應用價值

6.1 蛋白功能概述

Nanog是ANTP類同源盒轉錄因子家族成員，在小鼠早期胚胎及胚胎干細胞中特異性高表達。其核心生物學功能包括：

維持ES細胞多能性：Nanog與Oct4、Sox2構成核心轉錄調控網絡，共同激活多能性相關基因（如Rex1、Utf1、Fgf4）并抑制分化基因（如Gata6、Cdx2）。

延遲譜系定向：在胚胎發育過程中，Nanog表達下調是外胚層向原始內胚層或滋養層分化的前提條件。過表達Nanog可使ES細胞在缺乏LIF的情況下仍維持未分化狀態。

促進體細胞重編程：在iPSC誘導過程中，Nanog的強制表達可提高重編程效率，是獲得完全多能性所必需的因素之一。

6.2 表達模式特征

時間：在小鼠受精卵中開始表達于桑椹胚期，于內細胞團中達到高峰，原腸運動后迅速沉默。

空間：僅表達于內細胞團及原始外胚層，滋養層和已分化的胚外組織無表達。

細胞水平：Nanog表達具有異質性，即使在同一未分化ES細胞群體中，約10-30%細胞呈高表達狀態，其余細胞表達水平較低但可動態轉換。

6.3 抗體應用場景舉例

1. ES細胞多能性鑒定：通過WB檢測不同傳代批次或不同培養條件下Nanog蛋白水平，快速評估細胞多能性狀態。

2. 分化時間進程監測：在撤除LIF或添加視黃酸誘導ES細胞分化后，每隔24小時取樣檢測Nanog表達下降曲線。

3. 重編程效率分析：轉染重編程因子（Oct4/Sox2/Klf4/c-Myc）后不同天數，檢測Nanog的再度激活，作為iPSC克隆形成的早期標志。

4. 基因敲低/過表達驗證：使用siRNA或過表達質粒干擾Nanog后，WB檢測酸低效率或外源蛋白表達水平。