兔抗BARD1親和純化抗體：抗原親和純化，適用于人源樣本IP/WB檢測

一、產品概述

本文介紹一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人BARD1（BRCA1相關RING結構域蛋白1）的兔多克隆抗體（貨號：A300-263A）。該抗體特異性識別BARD1蛋白的第250–300位氨基酸區域，經抗原親和純化后以完整IgG形式提供，未偶聯標記物。已驗證反應種屬為人，可應用于免疫沉淀（IP）及免疫印跡（WB）實驗。

BARD1與BRCA1形成異源二聚體，作為E3泛素連接酶參與DNA損傷應答、雙鏈斷裂修復及中心體數量調控。可靠的特異性抗體對于研究BARD1在基因組穩定性維持及腫瘤發生中的功能至關重要。

二、詳細規格參數

參數 | 信息

靶標 | BARD1（BRCA1 associated RING domain 1）

反應種屬 | 人

應用 | IP, WB

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 完整IgG

免疫原 | 第250–300位氨基酸之間的區域

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

免疫原種屬 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

存儲條件 | 2–8 °C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮化鈉

三、抗原表位與生產信息

該抗體識別人BARD1蛋白第250–300殘基之間的表位，參考序列號為NP_000456.1（GeneID 580）。免疫原對應此區間。

純化工藝采用固相載體固定的表位特異性親和層析，確保僅富集識別目標表位的IgG分子，顯著降低非特異性交叉反應。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定（1 mg/mL IgG在A280處吸光度為1.4）。

四、應用方法與推薦條件

4.1 免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 蛋白裂解液

根據抗體濃度1000 ?g/ml換算，6 ?g對應6 ?l抗體。建議在裂解緩沖液中加入適當蛋白酶抑制劑，4°C旋轉孵育過夜后使用Protein A/G瓊脂糖珠捕獲復合物。

4.2 免疫印跡（WB）

推薦稀釋比：1:500 至 1:2500

通用條件：  

所有WB實驗均采用含5%脫脂牛奶的TBST作為封閉液及抗體稀釋液。一抗孵育方式為4°C過夜。

檢測體系差異：

樣本類型 | 推薦二抗 | 特殊說明

細胞裂解液WB | 山羊抗兔IgG（H+L）二抗（貨號A120-101P） | 無需額外阻斷

免疫沉淀產物WB | 抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體 | 封閉緩沖液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以阻斷重鏈交叉反應

注意事項：  

由于BARD1分子量約為87 kDa（與BRCA1形成復合物后更大），建議使用10–12% SDS-PAGE或梯度凝膠。轉膜后可考慮使用PVDF膜以增強大分子量蛋白的吸附。

五、儲存與穩定性

未稀釋抗體必須儲存于2–8°C，嚴禁冷凍。冷凍會導致IgG聚集和活性喪失。在推薦條件下，自收貨之日起可穩定保存1年。緩沖液中的0.09%疊氮化鈉可抑制微生物生長，若需用于細胞培養或活體實驗，請使用脫鹽柱或透析去除。

六、操作建議與常見問題排查

6.1 WB無信號或弱信號

提高一抗濃度：建議從1:500開始試探性稀釋。

延長曝光時間：BARD1本底表達水平可能低于管家蛋白，建議ECL曝光5–30分鐘。

使用陽性對照：建議使用過表達BARD1的細胞裂解液（如HEK293T轉染BARD1-Flag）驗證抗體活性。

檢查蛋白分子量：確認轉印后保留>100 kDa區域，部分低分子量marker不足以指示。

6.2 IP出現非特異性條帶

嚴格執行預清除：裂解液與同型IgG或無關抗體+Protein A/G珠子孵育1小時。

增加洗滌嚴謹性：使用含0.5% NP-40或0.1% SDS的裂解緩沖液洗滌3–5次。

使用輕鏈特異性二抗：WB檢測IP產物時務必采用抗兔IgG輕鏈HRP抗體，避免重鏈（約55 kDa）干擾目標信號。

6.3 保存與運輸注意事項

產品在冰袋或冷藏條件下運輸。收貨后應立即存于2-8°C，不可分裝于無蛋白的低吸附管中長期儲存，否則抗體濃度會因表面吸附而下降。若需長時間多次取用，可于無菌條件下分裝至含載體蛋白（如0.1% BSA）的管中，但分裝后仍需冷藏，勿凍存。