兔抗FANCA抗體親和純化，WB/IP/Flow Cyt信噪比優化顯著

在DNA損傷修復與范可尼貧血（Fanconi anemia, FA）研究中，FANCA蛋白是FA核心復合物的關鍵組分，參與DNA鏈間交聯損傷的修復。針對FANCA的高質量抗體對于免疫沉淀、免疫印跡及流式細胞術分析至關重要。以下提供一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗FANCA多克隆抗體（全IgG，抗原親和純化）（貨號:A301-980A）的詳細技術參數、應用條件及操作要點，供科研人員參考。

一、產品核心規格

靶點：FANCA（人反應性）  

宿主/克隆性：兔 / 多克隆  

抗體形式：全IgG，未偶聯  

免疫原：人FANCA蛋白第1405–1455位氨基酸之間的特異性表位（參考序列NP_000126.2，GeneID 2175），位于C端區域  

純化方式：抗原親和純化——將該表位固定于固相載體，從抗血清中特異性捕獲目標抗體  

濃度：200 ?g/ml（以比爾定律測定，1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）  

緩沖液：Tris-緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09% 疊氮鈉  

儲存與效期：2–8°C，自收貨起1年內穩定   

該抗體經抗原親和純化后，去除了血清中非特異性IgG及其他雜蛋白，顯著降低免疫印跡和免疫沉淀中的背景交叉反應，尤其適用于檢測內源性FANCA蛋白（分子量約163 kDa）。

二、應用性能與推薦條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

稀釋范圍：1:2000 – 1:10,000  

封閉及抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST  

一抗孵育：推薦4°C過夜  

二抗注意事項：  

檢測細胞裂解液時，可使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）二抗（如A120-101P）。  

檢測免疫沉淀后的樣品時，為避免變性條件下IgG重鏈（約55 kDa）與FANCA（163 kDa）以外的非特異性條帶干擾，建議使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，同時可在封閉液中添加5%正常豬血清（如Cat. No. S100-020）以進一步抑制非特異性結合。

在1:2000–1:10,000的寬稀釋范圍內，該抗體均可清晰識別HEK293、HeLa等細胞裂解液中內源性FANCA條帶。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推薦用量：6 ?g抗體 / mg 總蛋白裂解液  

適用樣本：人細胞或組織裂解物  

作為親和純化的多克隆抗體，該抗體識別FANCA C端區域（1405–1455）的多個表位，免疫沉淀效率高，能有效富集內源性FANCA及其復合物中的互作蛋白（如FANCG、FANCC等）。沉淀后的產物可采用WB驗證，配合輕鏈特異性二抗可避免重鏈信號干擾。

3. 流式細胞術（Flow Cytometry，Flow Cyt）

推薦用量：1 ?l 抗體 / 1×10^6 個細胞  

固定與透化：4% 甲醛固定，90% 甲醇透化  

檢測方式：需配合熒光標記的二抗（如Alexa Fluor 488標記的山羊抗兔IgG）進行細胞表面或胞內染色  

該條件適用于分析不同細胞周期階段或DNA損傷刺激下FANCA蛋白的表達水平變化，亦可用于評估FA患者細胞中FANCA的缺失情況。

三、儲存與操作注意事項

儲存：2–8°C，切勿冷凍，反復凍融會導致蛋白活性下降。  

防腐劑：疊氮鈉（0.09%）可抑制細菌生長，若后續實驗涉及細胞培養或需去除疊氮鈉，請提前用PBS透析。  

分裝建議：若短期內使用，可直接于2–8°C保存；長期儲存可無菌分裝后保持冷藏，避免污染。  

抗體在含BSA的緩沖液中穩定性良好，效期內濃度及活性保持不變。

四、FANCA靶點背景與研究意義

FANCA是范可尼貧血（Fanconi anemia）互補群A的編碼蛋白，屬于FA通路的核心成員。FA是一種常染色體隱性遺傳病，表現為先天性畸形、骨髓衰竭及高度癌癥易感性。FANCA與FANCB、FANCC等其他12個互補群蛋白（FANCD1/BRCA2、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCI、FANCJ/BRIP1、FANCL、FANCM、FANCN/PALB2）共同組裝成核內復合物，該復合物在DNA鏈間交聯損傷修復中發揮關鍵作用。

具體功能要點：

DNA損傷修復：FANCA是FA核心復合物的支架蛋白，負責穩定復合物并激活FANCD2單泛素化，進而啟動同源重組修復。

疾病關聯：FANCA基因突變是導致范可尼貧血的最常見原因（約占60-70%），患者成纖維細胞通常表現為對絲裂霉素C（MMC）等交聯劑高度敏感。

腫瘤抑制：FA通路缺陷與乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌等多種腫瘤發生相關，FANCA功能喪失可導致基因組不穩定性。

因此，高特異性的抗FANCA抗體可用于：

FA患者細胞系的補群分型鑒定；

DNA損傷修復機制研究（如MMC或順鉑處理后的蛋白動態變化）；

蛋白質相互作用分析（免疫沉淀聯合質譜）。