兔抗DDX3抗體親和純化，一抗多用，節約試驗成本

在RNA代謝與腫瘤生物學研究中，DDX3（DEAD-box helicase 3, X-linked）作為一類ATP依賴的RNA解旋酶，參與前體mRNA剪接、翻譯起始、RNA輸出及腫瘤抑制等多個關鍵過程。針對該靶點的高質量抗體是開展免疫印跡、免疫沉淀及組織化學分析的必備工具。以下圍繞由艾美捷Bethyl Laboratories推出的一款兔源抗DDX3多克隆抗體（全IgG，抗原親和純化）（貨號：A300-474A）的規格特性、實驗應用數據及使用要點進行系統說明，供科研人員參考。

一、產品核心規格

靶點：DDX3（人/小鼠反應性）  

宿主/克隆性：兔 / 多克隆  

抗體形式：全IgG，未偶聯  

免疫原：人DDX3蛋白第1–50位氨基酸之間的特異性表位（參考序列NP_001347.2，GeneID 1654）  

純化方式：抗原親和純化——將該表位固定于固相載體，從抗血清中特異性捕獲目標抗體  

濃度：200 ?g/ml（以比爾定律測定，1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）  

緩沖液：Tris-緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09% 疊氮鈉  

儲存與效期：2–8°C，自收貨起1年內穩定   

該抗體經親和純化后，去除了血清中非特異性IgG及其他雜蛋白，顯著降低免疫印跡和免疫沉淀中的背景交叉反應，尤其適用于低豐度DDX3的檢測。

二、應用性能與推薦條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

稀釋范圍：1:1000 – 1:10,000  

封閉及抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST  

一抗孵育：推薦4°C過夜  

二抗注意事項：  

檢測細胞裂解液時，可使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）二抗（如A120-101P）。  

檢測免疫沉淀后的樣品時，為避免變性條件下IgG重鏈（約55 kDa）與DDX3（約73 kDa）信號重疊，必須使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，同時建議在封閉液中添加5%正常豬血清（如Cat. No. S100-020）以進一步抑制非特異性結合。

這一策略可清晰區分目標蛋白與沉淀抗體的重輕鏈，避免假陰性或條帶誤讀。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推薦用量：6 ?g抗體 / mg 總蛋白裂解液  

適用樣本：人或小鼠細胞/組織裂解物  

該抗體作為親和純化的多克隆抗體，可識別DDX3 N端區域的多個表位，因此免疫沉淀效率高，能有效富集內源性DDX3蛋白，后續配合輕鏈特異性二抗進行WB驗證，結果可靠。

3. 免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）

稀釋范圍：1:200 – 1:1000  

抗原修復：強烈推薦使用枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導表位修復  

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）切片  

在優化后的IHC條件下，該抗體可對人及小鼠組織中DDX3進行特異性定位分析，適用于病理切片及發育生物學研究。

三、儲存與操作注意事項

儲存：2–8°C，切勿冷凍，反復凍融會導致蛋白活性下降。  

防腐劑：疊氮鈉（0.09%）可抑制細菌生長，但需注意若后續實驗涉及細胞培養或需去除疊氮鈉，請提前透析。  

分裝建議：若短期不用，可無菌分裝后于2–8°C保存，避免污染；不建議分裝后冷凍。  

抗體在含BSA的緩沖液中穩定性良好，效期內濃度及活性保持不變。

四、DDX3靶點背景與研究意義

DDX3（亦稱DDX3X、DBX、HLP2）屬于DEAD-box RNA解旋酶家族，其名稱來源于高度保守的Asp-Glu-Ala-Asp（DEAD）氨基酸基序。該蛋白利用ATP水解能量解開RNA二級結構，參與RNA代謝的全過程：

RNA剪接與輸出：影響前體mRNA的正確加工及核質轉運  

翻譯調控：作為eIF4E抑制蛋白，調節翻譯起始  

腫瘤抑制：轉錄激活p21啟動子，抑制腫瘤細胞生長  

病毒感染：丙型肝炎病毒（HCV）等調控DDX3功能，其表達下調與肝細胞癌發生發展密切相關  

因此，DDX3是癌癥生物學、病毒學及RNA調控領域的重要研究靶點。一款高特異性、經嚴格驗證的抗體能夠幫助研究者精準檢測DDX3的表達水平、細胞內定位及相互作用蛋白。