兔抗53BP1抗體親和純化，高效富集目標蛋白，低豐度樣品穩定輸出

53BP1（p53結合蛋白1）是DNA雙鏈斷裂損傷應答通路中的關鍵早期響應因子，在維持基因組穩定性、調控修復途徑選擇及腫瘤抑制中發揮核心作用。針對53BP1的高特異性抗體是研究DNA損傷修復、細胞周期檢查點以及腫瘤發生機制的重要工具。本文詳細介紹由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗53BP1親和純化多克隆抗體（貨號：A300-273A）的技術參數、生產工藝、Western blot應用條件及實驗要點，為用戶提供系統的操作參考。

一、產品基本規格

該抗體為兔多克隆抗體，靶向人53BP1蛋白（由TP53BP1基因編碼，GeneID 7158），同時與小鼠53BP1具有交叉反應性?？贵w形式為完整IgG，未偶聯標記物，亞型為IgG。采用特異性表位親和純化工藝獲得。抗體濃度為1000 ?g/ml（1 mg/ml），保存于Tris-檸檬酸鹽-磷酸鹽緩沖液（pH 7–8）中，含0.09%疊氮鈉作為防腐劑。儲存條件為2–8°C，自收貨之日起有效期為一年。

注意事項：緩沖液中含疊氮鈉，可抑制過氧化物酶活性。對于常規Western blot檢測，一抗稀釋至工作濃度后（如1:2,000–1:10,000），疊氮鈉濃度極低（<0.000045%），對HRP二抗活性影響可忽略。若進行超高靈敏度化學發光檢測，可通過透析或超濾去除疊氮鈉。疊氮鈉具毒性，操作時需戴手套并妥善處置廢液。

二、免疫原與表位信息

抗體采用特異性表位親和純化工藝。免疫原對應人53BP1蛋白第1925位氨基酸至C末端（C端截止于第1972位氨基酸）之間的區域（參考序列號NP_005648.1，GeneID 7158）。該表位位于53BP1的C端結構域，該區域包含與p53相互作用及DNA損傷應答相關的關鍵功能基序。親和純化時，將上述表位肽段固定于固相載體，從抗血清中捕獲特異性IgG，確?？贵w僅識別53BP1蛋白，而不與非相關蛋白發生交叉反應。

免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定（1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）。

三、推薦的應用與實驗條件

根據產品規格，該抗體主要驗證用于Western blot（WB）。未提供IHC或IP的驗證稀釋度，用戶如需拓展應用，需自行優化。

Western Blot（WB）

推薦稀釋度：1:2,000 – 1:10,000

凝膠建議：推薦使用3–8% Tris-乙酸酯凝膠。53BP1分子量較大（約210–220 kDa），低百分比凝膠或梯度凝膠可獲得更好的分離效果。常規Tris-甘氨酸體系也可使用，但建議采用4–12%梯度凝膠或6–8%固定濃度凝膠。

封閉與稀釋：使用5%脫脂牛奶-TBST作為封閉液和抗體稀釋液。一抗孵育條件為過夜（建議4°C緩慢搖動，以提高特異性結合）。

二抗：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）二抗（推薦貨號A120-101P）。HRP標記二抗后，采用ECL化學發光法檢測。

樣品制備建議

提取全細胞裂解液時，推薦使用含蛋白酶抑制劑（PMSF、cocktail）和磷酸酶抑制劑（如Na3VO4、NaF）的RIPA緩沖液或NP-40裂解液。

由于53BP1是核蛋白，制備核提取物可顯著富集目標蛋白。上樣前建議進行蛋白定量，每孔上樣30–50 ?g總蛋白。

煮沸變性時間建議5–10分鐘，53BP1分子量大且可能形成聚集，充分變性有助于改善電泳效果。

四、靶點生物學背景

53BP1（也稱p53結合蛋白1、TDRD30）最初被鑒定為p53的相互作用蛋白。后續研究發現，它是DNA雙鏈斷裂（DSB）損傷應答中的核心調控因子。在DNA損傷發生后，53BP1通過其Tudor結構域識別組蛋白H4K20me2和H2AK15ub等表觀標記，迅速被招募至損傷位點，形成核灶（foci）。

53BP1在修復途徑選擇中發揮關鍵作用：促進非同源末端連接（NHEJ）而抑制同源重組（HR）。它與Brca1形成拮抗關系，共同調控DSB修復方式的決策。在G1期，53BP1促進NHEJ；在S/G2期，被Brca1拮抗以允許HR進行。此外，53BP1還參與Chk2等檢查點激酶的磷酸化激活，介導細胞周期阻滯。

53BP1的功能異常與腫瘤發生、免疫缺陷及衰老密切相關。在BRCA1突變的乳腺癌中，53BP1缺失可恢復部分同源重組功能并導致治療抵抗。因此，該抗體適用于DNA損傷應答、腫瘤生物學及藥物篩選等領域的研究。

五、產品性能特點

1. 精確定位的表位：靶向53BP1 C端第1925–1972位氨基酸，該區域在多個物種中相對保守，支持人/小鼠交叉反應性。明確的表位區域便于用戶結合突變體或截短體實驗進行驗證。

2. 親和純化：抗原親和純化顯著降低非特異性背景，在Western blot中呈現清晰的單一條帶或少量特異條帶。

3. 高稀釋比：WB稀釋度最高達1:10,000，抗體使用經濟，適合高通量篩選或珍貴樣本分析。

4. 人/小鼠交叉反應：經驗證與小鼠53BP1反應，適用于鼠源細胞系或組織樣本，拓展了應用范圍。

5. 大分子量兼容性：產品明確推薦使用3–8% Tris-乙酸酯凝膠，說明針對大分子量蛋白（~220 kDa）進行了優化，確保轉膜效率和檢測靈敏度。

6. 穩定性：2–8°C儲存一年，無需冷凍，避免反復凍融導致的效價下降。