兔抗NIPBL抗體親和純化，有效富集染色質結合蛋白，助力染色體凝聚研究

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的NIPBL抗體（貨號A301-779A）是一款針對人NIPBL（Nipped-B-like，亦稱delangin）的兔源多克隆抗體，由美國制造，采用抗原親和純化工藝制備。該抗體以未偶聯的完整IgG形式提供，濃度為1000 ?g/ml，適用于免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）兩種應用，是研究姐妹染色單體粘連、染色體凝聚及Cornelia de Lange綜合征（CdLS）的重要工具。

二、技術規格

參數 | 詳細信息

靶標 | NIPBL（Nipped-B-like）

反應性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

格式 | 完整IgG

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

保存條件 | 2-8°C

有效期 | 收貨后1年

緩沖液 | Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮化鈉

三、免疫原與純化工藝

該抗體識別的表位位于人NIPBL蛋白第1025至1075位氨基酸殘基之間（編號參考NP_597677.2，GeneID 25836）。該區域位于NIPBL蛋白的中間部分，遠離其N端的HEAT重復結構域和C端的Scc2相關區域。

純化方式：使用固相載體上固定的NIPBL特異性表位進行抗原親和純化

濃度測定：通過比爾定律測定，1 mg/mL IgG在280 nm波長下的吸光度為1.4

四、產品背景

NIPBL基因與Cornelia de Lange綜合征

NIPBL基因最初被鑒定為Cornelia de Lange綜合征（CdLS）的致病基因。CdLS是一種異質性發育障礙，表現為多發性解剖畸形，包括特殊面容、生長遲緩、上肢缺陷、智力障礙及多器官系統異常。NIPBL基因突變是CdLS最常見的遺傳病因，約占臨床確診患者的50-60%。

分子功能

NIPBL蛋白產物也稱為delangin，與黑腹果蠅的Nipped-B蛋白具有高度同源性。Nipped-B屬于染色體黏合蛋白家族，在姐妹染色單體粘連、染色體凝聚和DNA修復中發揮關鍵作用。NIPBL作為粘連蛋白復合物的加載因子（cohesin loading factor），與MAU2形成復合物，負責將粘連蛋白復合物裝載到染色質上，從而介導姐妹染色單體的粘連。

五、臨床關聯研究

對NIPBL突變陽性與陰性個體的中期分裂相進行研究發現，NIPBL突變與早熟姐妹染色單體分離現象相關。這一結果表明NIPBL在人類中的功能與其果蠅同源物相似，即參與調控染色體的正確分離和粘連。

蛋白特征

NIPBL蛋白分子量巨大，約316 kDa，包含多個HEAT重復序列，這些重復序列介導蛋白-蛋白相互作用，特別是與粘連蛋白復合物亞基（如SMC1A、SMC3）的結合。

六、應用方法與實驗條件

免疫印跡（WB）

推薦稀釋比：1:10,000 - 1:25,000

凝膠推薦：3-8% Tris-乙酸酯凝膠（因NIPBL分子量約316 kDa，常規SDS-PAGE無法有效分離大分子蛋白）

封閉與稀釋液：5% 牛奶-TBST

一抗孵育：過夜孵育

細胞裂解物檢測：使用山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀物檢測：使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，封閉緩沖液中需添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

預期分子量：NIPBL蛋白約316 kDa。在WB中應觀察到接近該分子量的條帶。由于蛋白分子量極大，轉膜條件需特別優化。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g抗體 / mg裂解物

七、儲存與穩定性

存放于2-8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體聚集和活性喪失

抗體在疊氮化鈉存在下可穩定保存1年

取用時應使用無菌吸頭，避免微生物污染

八、研究應用場景

基于NIPBL的生物學功能，該抗體可應用于以下研究方向：

1. Cornelia de Lange綜合征機制研究：檢測CdLS患者細胞中NIPBL蛋白的表達水平及突變影響

2. 姐妹染色單體粘連調控：通過IP研究NIPBL與粘連蛋白復合物（cohesin）的相互作用

3. 染色體凝聚與DNA修復：分析NIPBL在有絲分裂及DNA損傷應答中的功能

4. 轉錄調控：NIPBL/cohesin復合物也參與遠距離增強子-啟動子相互作用，可結合ChIP-seq研究其染色質結合譜

NIPBL作為Cornelia de Lange綜合征的關鍵致病蛋白和粘連蛋白加載因子，在染色體粘連、DNA修復及轉錄調控中發揮核心作用。該抗體可廣泛應用于發育生物學、表觀遺傳學及染色體生物學研究。使用時應特別注意大分子量蛋白的WB優化條件（專用凝膠、延長轉膜、蛋白酶抑制），并設置適當的陽性/陰性對照以驗證特異性。嚴格遵循2-8°C保存條件，可獲得穩定可靠的實驗結果。