兔抗H2AX抗體親和純化，即用型緩沖體系與批次間一致性優勢

一、產品概述  

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗體為兔源多克隆抗體（貨號：A300-082A），特異性靶向組蛋白H2AX的C末端區域。H2AX是組蛋白H2A家族的關鍵成員，在DNA損傷修復應答和基因組穩定性維持中發揮核心作用。該抗體經抗原親和純化，未偶聯標記，適用于免疫印跡（WB）和免疫細胞化學/免疫熒光（ICC-IF），且與人、小鼠樣本有交叉反應性。以下將從基本參數、免疫原信息、應用條件、儲存穩定性及生物學背景等方面進行詳細說明。

二、關鍵規格參數

項目 | 詳細內容

靶標 | H2AX

反應種屬 | 小鼠、人類

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 對應人H2AX蛋白第93位至C末端之間的表位（Swiss-Prot P16104，GeneID 3014）

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純化方式 | 抗原親和純化（使用固定化的H2AX特異性表位）

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/mL

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊氮鈉

儲存條件 | 2–8 °C

保質期 | 收貨后1年

生產流程 | 親和純化后，通過Beer定律測定IgG濃度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值為1.4）

> 注：0.09%疊氮鈉作為防腐劑，使用時應考慮其對過氧化物酶標記二抗的影響，必要時可通過透析或超濾去除。

三、免疫原與特異性

本抗體的表位定位于人H2AX蛋白C末端（介于第93位氨基酸與末端之間）。通過固相載體上固定的特異性表位進行親和純化，確?？贵w識別天然及變性的H2AX。經內部驗證，該抗體可檢測人源和小鼠源H2AX，不與其他組蛋白家族成員發生顯著交叉反應。反應性覆蓋物種依據免疫原序列同源性預測，實際實驗中建議以陽性對照（如用喜樹堿或電離輻射處理后的細胞裂解液）確認信號。

四、推薦應用與實驗條件

以下稀釋度均為起始推薦范圍，用戶需根據具體實驗體系進行優化。

1. 免疫印跡（Western Blot, WB）

稀釋度：1:2000 – 1:10000  

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（Tris緩沖鹽水+0.1% Tween-20）  

孵育條件：一抗4°C孵育過夜（推薦）  

二抗推薦：山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體，如貨號A120-101P  

陽性對照：HeLa細胞裂解物、小鼠胚胎成纖維細胞裂解物或經DNA損傷誘導劑處理的樣本（如0.5 μM喜樹堿處理1小時）。

2. 免疫細胞化學/免疫熒光（ICC-IF）

稀釋度：1:200 – 1:1000  

固定方法：推薦使用甲醛固定  

通透處理：甲醛固定的細胞建議使用Triton X-100進行通透  

注意事項：對于石蠟包埋的細胞切片，推薦使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行抗原修復。

3. 免疫組織化學（IHC）— 僅作參考

稀釋度：1:1000 – 1:5000  

抗原修復：對FFPE組織切片，必須使用pH 6.0檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復  

應用范圍：雖然產品主要驗證了ICC-IF和WB，但IHC條件可作為優化起點，建議并行陰性對照（兔IgG）和陽性組織（如小鼠脾臟或睪丸）。

> 注：本產品未驗證用于流式細胞術、ChIP或IP，用戶需自行驗證。

五、產品特性與質量控制

純化工藝：采用表位特異性親和純化，較蛋白A/G純化具有更高的特異性，顯著降低背景。  

濃度準確性：通過A280定量，并基于IgG的消光系數折算，確保批次間一致性。  

功能驗證：每批抗體均通過WB檢測經DNA損傷處理的細胞裂解液，確認H2AX條帶（約15 kDa，磷酸化和非磷酸化形式均可識別，因表位位于C末端恒定區）。  

批間穩定性：生產記錄完整，遵循內部QC標準，符合ISO 9001質量管理體系（母公司Fortis Life Sciences）。

六、儲存與穩定性

儲存溫度：2–8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體變性、效價下降。  

運輸條件：濕冰運輸，收貨后請立即按上述溫度保存。  

分裝建議：若需長期使用，建議分裝后存放于2–8°C，避免污染。不可稀釋后長期儲存。  

有效期：自收貨之日起1年。過期產品可能信號減弱，建議重新訂購。

七、生物學背景：H2AX的功能與研究價值

H2AX是組蛋白H2A家族的變體，在真核生物中高度保守。其C末端含有一個保守的Ser139殘基，該殘基能被PI3K家族激酶（如ATM、ATR、DNA-PK）磷酸化，形成γH2AX。γH2AX是DNA雙鏈斷裂（DSB）的經典標志物，在DNA損傷修復、細胞周期檢查點激活和染色體穩定性維持中起關鍵作用。檢測總H2AX水平可用于評估組蛋白表達變化，而該抗體識別的表位不依賴于Ser139磷酸化狀態，因此可檢測細胞內總H2AX蛋白量，適用于分析藥物或基因操作對H2AX表達水平的影響。

典型研究領域：  

DNA損傷應答與修復機制  

放射生物學與化學致突變  

腫瘤發生與基因組不穩定性  

表觀遺傳學與染色質重塑  

細胞衰老與凋亡

注意事項：  

因H2AX分子量較?。s15 kDa），在WB實驗中建議使用高分辨率凝膠（如15% SDS-PAGE）并延長轉膜時間（使用PVDF膜，0.2 μm孔徑）。  

檢測γH2AX時需使用磷酸化特異性抗體（如A300-081A），本產品為非磷酸化特異性，適合檢測總蛋白。