兔抗Cul4a抗體親和純化，可同時驗證WB、IHC、IP，簡化實驗流程與試劑管理

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗體為兔源多克隆抗體（貨號：A300-739A），特異性靶向Cullin 4A（Cul4a）蛋白的C末端區域（第709位至C末端之間）。Cul4a是cullin家族成員之一，作為E3泛素連接酶復合物的骨架蛋白，在細胞周期調控、DNA損傷檢查點應答及底物蛋白泛素化降解中發揮核心作用。該抗體經抗原親和純化，未偶聯標記，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB），且與人、小鼠樣本有交叉反應性。以下將從基本參數、免疫原信息、應用條件、儲存穩定性及生物學背景等方面進行詳細說明。

二、關鍵規格參數

項目 | 詳細內容

靶標| Cul4a (Cullin 4A)

反應種屬| 小鼠、人類

宿主| 兔

克隆性| 多克隆

抗體形式| 完整IgG

免疫原| 對應人Cul4a蛋白第709位至C末端（第759位）之間的表位（參考序列NP_001008895.1，GeneID 8451）

亞型| IgG

偶聯物| 未偶聯

純化方式| 抗原親和純化（使用固定化的Cul4a特異性表位）

抗原物種| 人

濃度| 1000 ?g/mL

緩沖液| Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊氮鈉

儲存條件| 2–8 °C

保質期| 收貨后1年

生產流程| 親和純化后，通過Beer定律測定IgG濃度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值為1.4）

> 注：0.09%疊氮鈉作為防腐劑，使用IP二抗時若采用HRP標記，需注意疊氮鈉會抑制HRP活性。建議在IP洗脫或二抗孵育前充分去除疊氮鈉。

三、免疫原與特異性

本抗體的表位定位于人Cul4a蛋白的C末端區域（介于第709位氨基酸與第759位C末端之間）。通過固相載體上固定的特異性表位進行親和純化，確保抗體識別天然及變性的Cul4a。經內部驗證，該抗體可檢測人源和小鼠源Cul4a，不與其他cullin家族成員（如Cul1、Cul2、Cul3、Cul4b等）發生顯著交叉反應。反應性覆蓋物種依據免疫原序列同源性預測，實際實驗中建議以陽性對照（如HEK293或HeLa細胞裂解液）確認信號。

四、推薦應用與實驗條件

以下稀釋度均為起始推薦范圍，用戶需根據具體實驗體系進行優化。

1. 免疫印跡（Western Blot, WB）

稀釋度：1:10,000 – 1:25,000（高靈敏度，可顯著節約抗體用量）  

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（Tris緩沖鹽水+0.1% Tween-20）  

孵育條件：一抗4°C孵育過夜（推薦）  

二抗推薦：  

常規細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體，如貨號A120-101P。  

免疫沉淀后WB：為避免變性IP產物中重鏈（~55 kDa）信號干擾，推薦使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP標記二抗，并在封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景。  

陽性對照：HEK293、HeLa或小鼠胚胎成纖維細胞裂解物，也可使用過表達Cul4a的細胞系。

2. 免疫組織化學（IHC）

稀釋度：1:1000 – 1:5000  

抗原修復：對FFPE（福爾馬林固定、石蠟包埋）組織切片，必須使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復。  

推薦對照：使用兔IgG同型對照作為陰性對照，以陽性組織（如小鼠脾臟、睪丸或多種腫瘤組織）確認染色特異性。  

檢測系統：適用于顯色法（DAB）或熒光法IHC。

3. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗體 / mg總蛋白裂解液

操作建議：  

裂解液推薦使用非變性裂解緩沖液（如NP-40或Triton X-100體系），避免破壞蛋白-蛋白相互作用。  

孵育條件：4°C旋轉孵育2小時或過夜。  

使用Protein A/G瓊脂糖或磁珠捕獲免疫復合物。  

洗脫后通過WB檢測，務必使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗以避免重鏈干擾。  

陽性對照：過表達Cul4a的細胞裂解液或已知內源性Cul4a表達量較高的細胞（如HeLa、HEK293）。

> 注：本產品未驗證用于ICC-IF或ChIP，用戶需自行探索。

五、產品特性與質量控制

純化工藝：采用表位特異性親和純化，較常規蛋白A/G純化具有更高的特異性，顯著降低非特異性背景。C末端表位的選擇避免了與其它cullin家族成員的高度同源區，提升靶向性。  

濃度與效價：濃度高達1000 ?g/mL，WB推薦稀釋比可達1:25,000，意味著每微升抗體可制備25 mL工作液，經濟性突出。  

功能驗證：每批抗體均通過WB檢測多種細胞裂解液中的內源性Cul4a（分子量約90 kDa），確認單一條帶位置正確。  

批次間一致性：生產記錄完整，遵循內部QC標準，符合ISO 9001質量管理體系（母公司Fortis Life Sciences）。  

優勢總結：  

高稀釋比 → 實驗成本低  

多應用驗證（IHC、IP、WB） → 一抗多用  

長效穩定儲存（2-8°C） → 使用便捷  

六、儲存與穩定性

儲存溫度：2–8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體變性、效價下降。  

運輸條件：濕冰運輸，收貨后請立即按上述溫度保存。  

分裝建議：若需長期使用，建議分裝成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀釋后長期儲存。  

有效期：自收貨之日起1年。過期產品可能信號減弱，建議重新訂購。  

七、生物學背景：Cul4a的功能與研究價值

Cul4a是cullin蛋白家族的成員之一，作為骨架蛋白參與組裝Cullin-RING E3泛素連接酶復合物（CRL4）。該復合物包含Cul4a、Rbx1、DDB1以及多種底物識別受體（如DCAF家族蛋白）。CRL4復合物介導多種關鍵底物的泛素化修飾，進而通過蛋白酶體途徑降解底物，調控以下重要生理過程：

細胞周期調控：CRL4復合物降解CDT1、p21、p27等細胞周期調節因子，確保DNA復制的有序進行。  

DNA損傷應答：在紫外線或復制壓力下，CRL4復合物（含DDB2或CSA受體）參與核苷酸切除修復和跨損傷合成。  

染色質重塑與表觀遺傳：Cul4a參與組蛋白H3/H4的泛素化，影響基因轉錄活性。  

腫瘤發生與發展：CUL4A基因在多種癌癥（如乳腺癌、肝癌、結直腸癌）中擴增或過表達，與不良預后相關，因此成為潛在的治療靶點。