兔抗Raptor抗體親和純化賦能細胞生長、代謝與自噬研究

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗體為兔源多克隆抗體（貨號：A300-553A），特異性靶向Raptor（mTOR調節相關蛋白）的N末端區域（第1至50位氨基酸）。Raptor是mTORC1復合物的核心組分，該復合物整合生長因子、營養和能量信號，通過磷酸化下游底物S6K和4E-BP1來調控細胞生長、增殖和代謝?？贵w經抗原親和純化，未偶聯標記，適用于免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB），且反應種屬為人。以下將從基本參數、免疫原信息、應用條件、儲存穩定性及生物學背景等方面進行詳細說明。

一、關鍵規格參數

項目 | 詳細內容

靶標 | Raptor (Regulatory Associated Protein of mTOR, RPTOR)

反應種屬 | 人類

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 對應人Raptor蛋白第1至50位氨基酸之間的表位（參考序列AAM09075.1，GeneID 57521）

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純化方式 | 抗原親和純化（使用固定化的Raptor特異性表位）

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/mL

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊氮鈉

儲存條件 | 2–8 °C

保質期 | 收貨后1年

生產流程 | 親和純化后，通過Beer定律測定IgG濃度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值為1.4）

> 注：0.09%疊氮鈉作為防腐劑，在IP后WB使用HRP標記二抗時需注意疊氮鈉會抑制HRP活性。建議在IP洗脫或二抗孵育前充分去除疊氮鈉。

二、免疫原與特異性

本抗體的表位定位于人Raptor蛋白的N末端區域（第1至50位氨基酸）。通過固相載體上固定的特異性表位進行親和純化，確保抗體識別天然及變性的Raptor。該N末端區域在不同物種間相對保守，但經驗證本抗體主要識別人源Raptor，對小鼠反應性未確認（規格中僅標注人）。親和純化步驟有效去除了針對其它表位的交叉反應抗體，降低背景。實際實驗中建議以陽性對照（如HEK293或HeLa細胞裂解液）確認信號。

三、推薦應用與實驗條件

以下稀釋度均為起始推薦范圍，用戶需根據具體實驗體系進行優化。

1. 免疫印跡（Western Blot, WB）

稀釋度：1:2000 – 1:10,000  

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（Tris緩沖鹽水+0.1% Tween-20）  

孵育條件：一抗4°C孵育過夜（推薦）  

二抗推薦：  

常規細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體，如貨號A120-101P。  

免疫沉淀后WB：為避免變性IP產物中重鏈（~55 kDa）信號干擾，推薦使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP標記二抗，并在封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景。  

陽性對照：HEK293、HeLa或MCF7細胞裂解液。Raptor分子量約為150 kDa，建議使用高分辨率凝膠和充分轉膜條件。

2. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗體 / mg總蛋白裂解液  

操作建議：  

裂解液推薦使用非變性裂解緩沖液（如NP-40或Triton X-100體系），避免破壞mTORC1復合物的蛋白-蛋白相互作用。  

孵育條件：4°C旋轉孵育2小時或過夜。  

使用Protein A/G瓊脂糖或磁珠捕獲免疫復合物。  

洗脫后通過WB檢測，務必使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗以避免重鏈干擾。  

陽性對照：過表達Raptor的細胞裂解液或內源性表達較高的細胞（如HEK293、HeLa）。

> 注：本產品未驗證用于IHC或ICC-IF，用戶需自行探索。

四、產品特性與質量控制

純化工藝：采用表位特異性親和純化，較常規蛋白A/G純化具有更高的特異性，顯著降低非特異性背景。N末端表位的選擇避免了與其它mTOR復合物組分（如mLst8、Deptor等）的同源區，提升靶向性。  

濃度與效價：濃度高達1000 ?g/mL，WB推薦稀釋比可達1:10,000，經濟性良好。  

功能驗證：每批抗體均通過WB檢測多種細胞裂解液中的內源性Raptor（~150 kDa），確認單一條帶位置正確。同時通過IP驗證其捕獲內源性Raptor及mTORC1復合物的能力。  

批次間一致性：生產記錄完整，遵循內部QC標準，符合ISO 9001質量管理體系（母公司Fortis Life Sciences）。  

五、儲存與穩定性

儲存溫度：2–8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體變性、效價下降。  

運輸條件：濕冰運輸，收貨后請立即按上述溫度保存。  

分裝建議：若需長期使用，建議分裝成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀釋后長期儲存。  

有效期：自收貨之日起1年。過期產品可能信號減弱，建議重新訂購。