兔抗Cul3抗體親和純化，經濟型適用于高通量篩選與珍貴樣本檢測

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗體為兔源多克隆抗體（A301-109A），特異性靶向Cullin 3（Cul3）蛋白的C末端區域（第675至725位氨基酸之間）。Cul3是cullin家族成員之一，作為E3泛素連接酶復合物的骨架蛋白，在有絲分裂過程中發揮關鍵作用，包括染色體正確排列和胞質分裂完成。該抗體經抗原親和純化，未偶聯標記，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB），且與人、小鼠樣本有交叉反應性。以下將從基本參數、免疫原信息、應用條件、儲存穩定性及生物學背景等方面進行詳細說明。

一、關鍵規格參數

項目 | 詳細內容

靶標 | Cul3 (Cullin 3)

反應種屬 | 小鼠、人類

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 對應人Cul3蛋白第675至725位氨基酸之間的表位（參考序列NP_003581.1，GeneID 8452）

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純化方式 | 抗原親和純化（使用固定化的Cul3特異性表位）

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/mL

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊氮鈉

儲存條件 | 2–8 °C

保質期 | 收貨后1年

生產流程 | 親和純化后，通過Beer定律測定IgG濃度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值為1.4）

> 注：0.09%疊氮鈉作為防腐劑，使用HRP標記二抗時需注意其抑制作用。IP洗脫或二抗孵育前建議充分去除疊氮鈉。

二、免疫原與特異性

本抗體的表位定位于人Cul3蛋白的C末端區域（第675至725位氨基酸）。通過固相載體上固定的特異性表位進行親和純化，確?？贵w識別天然及變性的Cul3。經內部驗證，該抗體可檢測人源和小鼠源Cul3，不與其他cullin家族成員（如Cul1、Cul2、Cul4a、Cul4b、Cul5、Cul7等）發生顯著交叉反應。反應性覆蓋物種依據免疫原序列同源性預測，實際實驗中建議以陽性對照（如HEK293或HeLa細胞裂解液）確認信號。C末端區域的選擇有助于避免與BTB接頭蛋白的同源區干擾，提升靶向特異性。

三、推薦應用與實驗條件

以下稀釋度均為起始推薦范圍，用戶需根據具體實驗體系進行優化。

1. 免疫印跡（Western Blot, WB）

稀釋度：1:1000 – 1:5000  

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（Tris緩沖鹽水+0.1% Tween-20）  

孵育條件：一抗4°C孵育過夜（推薦）  

二抗推薦：  

常規細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體，如貨號A120-101P。  

免疫沉淀后WB：為避免變性IP產物中重鏈（~55 kDa）信號干擾，推薦使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP標記二抗，并在封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景。  

陽性對照：HEK293、HeLa或小鼠胚胎成纖維細胞裂解液。Cul3分子量約為85–90 kDa，建議使用適當濃度的分離膠（8–10% SDS-PAGE）和PVDF膜（0.45 μm孔徑）。

2. 免疫組織化學（IHC）

稀釋度：1:500 – 1:2000  

抗原修復：對FFPE（福爾馬林固定、石蠟包埋）組織切片，必須使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復。  

推薦對照：使用兔IgG同型對照作為陰性對照，以陽性組織（如小鼠脾臟、睪丸或多種腫瘤組織）確認染色特異性。  

檢測系統：適用于顯色法（DAB）或熒光法IHC。

3. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗體 / mg總蛋白裂解液

操作建議：  

裂解液推薦使用非變性裂解緩沖液（如NP-40或Triton X-100體系），避免破壞Cul3與其底物及接頭蛋白（如BTB蛋白）的相互作用。  

孵育條件：4°C旋轉孵育2小時或過夜。  

使用Protein A/G瓊脂糖或磁珠捕獲免疫復合物。  

洗脫后通過WB檢測，務必使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗以避免重鏈干擾。  

陽性對照：過表達Cul3的細胞裂解液或內源性表達較高的細胞（如HeLa、HEK293）。

> 注：本產品未驗證用于ICC-IF或ChIP，用戶需自行探索。

四、儲存與穩定性

儲存溫度：2–8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體變性、效價下降。  

運輸條件：濕冰運輸，收貨后請立即按上述溫度保存。  

分裝建議：若需長期使用，建議分裝成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀釋后長期儲存。  

有效期：自收貨之日起1年。過期產品可能信號減弱，建議重新訂購。