兔抗NCoR抗體親和純化：染色質免疫沉淀、免疫沉淀與蛋白質印跡綜合應用指南

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的NCoR抗體（貨號：A301-145A）是一款靶向人類核受體輔阻遏蛋白1（NCoR）中間區域（第1525–1575位氨基酸）的兔源多克隆抗體。該抗體以全IgG形式提供，經抗原親和純化，未偶聯標記物，濃度為1000 ?g/ml，適用于染色質免疫沉淀（ChIP）、免疫沉淀（IP）及蛋白質印跡（WB）等多種應用場景，是研究核受體介導的轉錄抑制、組蛋白去乙酰化及染色質重塑機制的重要工具。

二、關鍵規格參數

2.1 免疫原與表位特異性

免疫原對應人類核受體輔阻遏蛋白1（NCOR1）第1525至1575位氨基酸之間的區域，參考序列號為NP_006302.2（GeneID 9611）。該區域位于蛋白的中部結構域，遠離N端的SANT結構域和C端的HDAC結合區，可有效識別全長NCoR蛋白，同時避免與其他含類似重復序列的蛋白（如NCoR2/SMRT）發生非預期交叉反應。

2.2 物理與生化性質

參數 | 詳情

靶點 | NCoR（核受體輔阻遏蛋白1）

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

純化方式 | 抗原親和純化（使用固定化表位）

濃度 | 1000 ?g/ml（A280法測定，1 mg/ml IgG吸光度1.4）

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮鈉

同型對照 | IgG

抗原種屬 | 人類

反應種屬 | 該信息未明確列出（免疫原為人源，建議在人類樣本中驗證；對小鼠NCoR可能有交叉反應，需自行測試）

2.3 儲存與穩定性

儲存于2–8°C，嚴禁冷凍。自收貨之日起有效期一年。緩沖液中的疊氮鈉可作為抗菌防腐劑，但在用于ChIP實驗前，建議通過透析或稀釋降低疊氮鈉濃度（通常至0.01%以下），以免影響染色質片段化或后續酶反應。

三、應用方法與推薦用量

3.1 染色質免疫沉淀（ChIP）

推薦用量：2 ?g 抗體 / 每次ChIP反應。  

適用技術：ChIP-qPCR 或 ChIP-seq。  

注意事項：  

染色質片段化推薦使用超聲或微球菌核酸酶消化，片段長度控制在200–600 bp。  

建議每ChIP反應使用10–25 ?g 染色質（以DNA含量計）。  

需設置陰性對照（兔IgG）和陽性對照（如抗H3K4me3或抗RNA Pol II抗體）。

3.2 免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 總蛋白裂解液。  

操作要點：  

使用非變性裂解液（如含150 mM NaCl、1% NP-40、50 mM Tris pH 7.5）并補充蛋白酶抑制劑。  

推薦4°C旋轉孵育2–4小時或過夜。  

使用蛋白A/G瓊脂糖珠或磁珠捕獲免疫復合物。

3.3 蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋比：1:500 – 1:1000。  

特殊凝膠建議：推薦使用3-8% Tris-乙酸鹽（Tris-acetate）梯度凝膠，因為NCoR蛋白分子量較大（約270 kDa），傳統Tris-甘氨酸凝膠難以有效分離高分子量蛋白。  

標準操作流程：  

封閉液與抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST。  

一抗孵育：推薦4°C過夜。  

二抗系統：對于細胞裂解液直接WB，使用山羊抗兔IgG（H+L）抗體（貨號A120-101P）；對于IP產物的WB，必須使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低重鏈干擾。

四、產品背景與生物學意義

4.1 NCoR的功能機制

核受體輔阻遏蛋白NCoR（又稱NCOR1）是核受體轉錄抑制的核心調控因子。它通過以下機制介導基因沉默：

1. 核受體結合：與未配體的甲狀腺激素受體、視黃酸受體、雌激素受體、雄激素受體、孕激素受體及糖皮質激素受體等互作。

2. 募集輔阻遏復合物：通過C末端結構域與SIN3A/SIN3B結合，進而招募組蛋白去乙?；窰DAC1和HDAC2。

3. 染色質致密化：HDAC去除組蛋白乙?；?，使染色質結構緊縮，抑制轉錄因子進入DNA。

NCoR在發育、代謝、炎癥及癌癥中均有重要功能。

4.2 研究應用方向

研究方向 | 應用方式 | 說明

核受體信號轉導 | ChIP-qPCR | 檢測NCoR在特定基因啟動子或增強子上的富集變化，觀察激素處理后的解離/招募

表觀遺傳調控 | ChIP-seq | 全基因組水平分析NCoR結合圖譜，識別輔阻遏網絡

蛋白-蛋白相互作用 | IP + WB | 驗證NCoR與HDAC1、HDAC2、SIN3A或核受體的內源結合

蛋白表達水平檢測 | WB | 比較不同組織、處理或疾病狀態下NCoR蛋白表達量