兔抗CKIIα'抗體親和純化：免疫沉淀與蛋白質印跡雙重應用的技術詳解

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的CKII alpha'抗體（貨號：A300-199A）是一款靶向人類酪蛋白激酶II alpha'亞基（CKII α'）C末端區域的兔源多克隆抗體。該抗體以全IgG形式提供，經抗原親和純化，未偶聯標記物，濃度為1000 ?g/ml，適用于小鼠和人類樣本的免疫沉淀（IP）及蛋白質印跡（WB）檢測。

本抗體為研究細胞周期調控、電離輻射應激響應及細胞凋亡信號通路中的CKII激酶復合物功能提供了可靠的工具。

二、關鍵規格參數

2.1 免疫原與表位特異性

免疫原對應人類酪蛋白激酶2 alpha 2亞基（CKII α'）第300位氨基酸至C末端（第350位）之間的區域，參考序列號為NP_001887.1（GeneID 1459）。  

該表位位于蛋白的調控或相互作用結構域內，可確?？贵w對α'亞基的特異性識別，避免與CKII alpha亞基（CKII α）發生交叉反應。

2.2 物理與生化性質

參數 | 詳情

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形式 | 全IgG

純化方式 | 抗原親和純化（使用固定化表位）

濃度 | 1000 ?g/ml（A280法測定，1 mg/ml IgG吸光度1.4）

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊氮鈉

同型對照 | IgG

抗原種屬 | 人類

反應種屬 | 小鼠、人類

2.3 儲存與穩定性

儲存條件為2–8°C，嚴禁冷凍。自收貨之日起有效期一年。緩沖液中的疊氮鈉可作為抗菌防腐劑，但在某些檢測體系（如HRP偶聯二抗系統）中可能需透析去除。

三、應用方法與推薦稀釋比

3.1 免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 ?g 抗體 / mg 總蛋白裂解液。  

注意事項：該抗體在IP實驗中需配合適當的二抗檢測系統。產品說明建議：若對免疫沉淀后的產物進行蛋白質印跡檢測，應使用抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020），以降低重鏈干擾。

3.2 蛋白質印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000。  

標準操作流程：  

封閉液與抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST。  

一抗孵育：推薦過夜（4°C或室溫）。  

二抗系統：對于細胞裂解液的直接WB，可使用山羊抗兔IgG（H+L）抗體（貨號A120-101P）；對于IP產物的WB，務必使用輕鏈特異性二抗并加豬血清。

3.3 通用注意事項

不同批次細胞或組織樣本的最佳稀釋比可能略有差異，建議用戶進行梯度預實驗。  

疊氮鈉會抑制HRP活性，使用含疊氮鈉的抗體進行WB或IP前，如后續涉及HRP標記二抗，需通過透析或稀釋降低疊氮鈉濃度至0.01%以下。

四、產品背景與生物學意義

4.1 CKII激酶復合物結構

酪蛋白激酶II（CKII）是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在細胞周期進程中不可或缺。其典型結構為異源四聚體：包含兩個催化亞基（α 或 α'）和兩個非催化調節亞基（β）。  

CKII α：由基因CSNK2A1編碼。  

CKII α'：由基因CSNK2A2編碼，即本抗體靶向的亞基。

盡管α和α'在某些功能上可相互代償，但在電離輻射（IR）誘導的DNA損傷響應中，兩者獨立發揮作用，共同抑制細胞凋亡信號。

4.2 別稱

CK II alpha'；CK2A2；CK2alpha'；casein kinase 2 alpha'等

4.3 研究應用方向

1. 細胞周期調控：CKII磷酸化多種底物，參與G1/S及G2/M檢查點控制。  

2. DNA損傷應答：電離輻射后，CKII α'獨立于α亞基發揮抗凋亡功能，本抗體可用于區分兩種亞基的作用。  

3. 激酶復合物組裝：通過免疫沉淀結合WB，分析α'與β亞基的相互作用。

五、操作建議與常見問題排查

5.1 免疫沉淀優化建議

確保裂解液中含有蛋白酶抑制劑（如PMSF、cocktail）和磷酸酶抑制劑，因CKII本身為激酶，避免去磷酸化干擾。  

推薦使用蛋白A/G磁珠或瓊脂糖珠，每毫克總蛋白加入6 ?g抗體后，4°C旋轉孵育2–4小時或過夜。  

洗滌緩沖液可使用含0.1–0.5% NP-40或Tween-20的TBS或PBS，以降低非特異性背景。

5.2 蛋白質印跡常見問題

問題 | 可能原因 | 解決方案

多條非特異條帶 | 多克隆抗體固有特性 | 提高稀釋比至1:10,000；優化封閉時間

無信號或信號弱 | 蛋白表達量低 | 增加上樣量；使用陽性對照（如HeLa或293T裂解液）

背景高 | 二抗非特異性結合 | 使用輕鏈特異性二抗進行IP-WB；增加洗滌次數

5.3 陽性對照建議

細胞系：HeLa、HEK293、NIH/3T3（小鼠）  

處理條件：可不處理（CKII α'組成型表達），或使用20–50 ?M DRB（CKII抑制劑）處理以觀察信號下降。