兔抗PHLPPL抗體親和純化，IP/WB雙平臺驗證，精準檢測Akt調控因子

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗PHLPPL抗體親和純化抗體，貨號：A300-661A是一款以兔為宿主來源、針對人PHLPPL蛋白的多克隆抗體。該抗體采用抗原親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供，濃度為200 ?g/ml，未偶聯任何標記物，適用于免疫沉淀及免疫印跡實驗。抗體同時識別小鼠和人類來源的PHLPPL，具有跨物種反應性，是Akt信號通路研究中重要的檢測工具。

二、靶點信息：PHLPPL / PHLPP2

PHLPPL（PH domain leucine-rich repeat-containing protein phosphatase-like），亦稱PHLPP2，屬于PH結構域和富含亮氨酸重復序列的蛋白磷酸酶家族。該蛋白的核心功能是去磷酸化并失活Akt——Akt是調控細胞存活與凋亡平衡的關鍵信號分子。通過使Akt去磷酸化，PHLPPL可觸發細胞凋亡并抑制腫瘤細胞生長。

PHLPPL與PHLPP1功能相似，兩者協同作用，通過靶向特定的Akt亞型選擇性終止Akt信號通路。PHLPPL也被稱為PHLPP2或PPM3B（蛋白磷酸酶，Mg??/Mn??依賴性3B）。

三、免疫原與特異性

本抗體識別的表位位于人PHLPPL蛋白第1275位至C末端（第1323位）區域之間（參考序列NP_055835.2，GeneID 23035）。具體免疫原設計針對1273至C末端區域，該區域對應蛋白的C末端結構域。

抗體采用固相載體上固定的表位特異性肽段進行親和純化，確保對PHLPPL的高特異性識別，避免與PHLPP1或其他含PH結構域或亮氨酸重復序列的蛋白發生交叉反應。

四、產品規格與儲存

參數 | 詳情

靶點 | PHLPPL / PHLPP2

反應性 | 小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形態 | 全IgG

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 200 ?g/ml

緩沖液 | 含0.1% BSA及0.09%疊氮鈉的Tris緩沖鹽水

儲存條件 | 2–8°C

有效期 | 自收貨起1年

濃度測定：采用比爾定律測定免疫球蛋白濃度，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長的吸光度為1.4。

五、應用與推薦稀釋度

應用 | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀 | 6 ?g/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ?g抗體

免疫印跡 | 1:2000 – 1:10,000 | 推薦起始稀釋度1:2000

六、免疫印跡操作要點

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% Milk-TBST（不可使用BSA，牛奶封閉效果更佳）

一抗孵育：過夜（overnight），推薦4°C或室溫

細胞裂解液WB檢測：

二抗推薦：山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀產物WB檢測：

二抗推薦：抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體（避免重鏈干擾）

封閉緩沖液添加：5%正常豬血清（貨號S100-020），以降低非特異性背景

七、技術要點與優化建議

1. 目標蛋白分子量與凝膠選擇

PHLPPL/PHLPP2的分子量約為132–140 kDa（基于氨基酸序列）。在WB檢測中：

推薦使用6-8% SDS-PAGE凝膠或4-12%梯度膠

轉移條件：濕轉建議300 mA恒流2-3小時，或4°C過夜

可使用PVDF膜或NC膜，PVDF結合力更高

2. 免疫沉淀的關鍵優化

抗體用量：6 ?g/mg總蛋白裂解物是經驗證的標準用量。若蛋白表達量低，可適當增加至8-10 ?g/mg。

裂解液選擇：推薦使用含蛋白酶抑制劑的RIPA緩沖液（50 mM Tris pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% 脫氧膽酸鈉, 0.1% SDS），可有效釋放核及細胞質蛋白。

裂解物濃度：建議使用1-2 mg總蛋白進行IP，確保目標蛋白豐度。

洗滌嚴格性：使用含0.1% Tween-20的TBS或PBS洗滌3-5次，每次5分鐘，以降低非特異性條帶。

3. 二抗選擇的關鍵考量

在檢測IP產物的WB時，常規抗兔IgG二抗會同時識別抗體的重鏈（~55 kDa）和輕鏈（~25 kDa）。由于PHLPPL分子量為132-140 kDa，遠大于重鏈和輕鏈，重鏈信號不會直接干擾目標條帶。但若實驗涉及近分子量（50-60 kDa）的目標蛋白，則必須使用輕鏈特異性二抗以避免干擾。本產品信息仍建議IP-WB中使用輕鏈HRP二抗，以降低背景，提高信噪比。

4. 疊氮鈉的注意事項

緩沖液中含有0.09%疊氮鈉作為防腐劑。如計劃對抗體進行偶聯標記（如生物素或HRP），需注意疊氮鈉會抑制標記反應，建議使用前通過透析或脫鹽去除。