兔抗RNA聚合酶II抗體親和純化，跨物種轉錄研究核心工具

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗RNA聚合酶II抗體親和純化抗體（貨號：A300-653A）是一款以兔為宿主來源、針對人RNA聚合酶II的多克隆抗體。該抗體采用抗原親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供，濃度為200 ?g/ml，未偶聯任何標記物，適用于免疫沉淀及免疫印跡實驗?？贵w同時識別小鼠和人類來源的RNA聚合酶II，具有跨物種反應性。

二、靶點信息：RNA聚合酶II（RPB1）

RNA聚合酶II是一種依賴DNA的RNA聚合酶，以四種核糖核苷三磷酸為底物，催化DNA轉錄為RNA。其中，RPB1（RNA polymerase II subunit B1）是該酶的最大亞基，也是催化活性中心的核心組分，與第二大亞基共同形成聚合酶活性中心。RPB1負責合成mRNA前體及多種功能性非編碼RNA，是真核生物基因轉錄調控的關鍵分子。

別稱：DNA-directed RNA polymerase II largest subunit、RPB1、RPBh1、RpIILS、RPO2、RPOL2、hRPB220、hsRPB1、POLR2、POLRA等

三、免疫原與特異性

本抗體識別的表位位于人RNA聚合酶II的C末端重復區（C-terminal repeat）。具體免疫原設計針對第1600至1650位氨基酸之間的區域，該區域對應RPB1亞基的特征性C末端結構域（CTD）。CTD由多個保守的七肽重復序列（YSPTSPS）組成，在轉錄調控中發揮關鍵作用，其磷酸化狀態是RNA聚合酶II活性的重要標志。

抗體采用固相載體上固定的表位特異性肽段進行親和純化，確保對RNA聚合酶II的高特異性識別，避免與非相關核蛋白的交叉反應。

四、產品規格與儲存

參數 | 詳情

靶點 | RNA聚合酶II（RPB1）

反應性 | 小鼠、人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形態 | 全IgG

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 200 ?g/ml

緩沖液 | 含0.1% BSA及0.09%疊氮鈉的Tris緩沖鹽水

儲存條件 | 2–8°C

有效期 | 自收貨起1年

濃度測定：采用比爾定律測定免疫球蛋白濃度，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長的吸光度為1.4。

五、應用與推薦稀釋度

應用 | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀 | 6 ?g/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ?g抗體

免疫印跡 | 1:2000 – 1:10,000 | 推薦使用3-8% Tris-醋酸凝膠

六、免疫印跡操作要點

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% Milk-TBST

一抗孵育：過夜（overnight）

細胞裂解液WB檢測：

二抗推薦：山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀產物WB檢測：

二抗推薦：抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體

封閉液添加：5%正常豬血清（貨號S100-020）

凝膠選擇：RPB1分子量約為220 kDa，建議使用3-8% Tris-醋酸凝膠以獲得最佳分離效果和轉移效率。

七、總結

A300-653A是一款針對RNA聚合酶II最大亞基RPB1 C末端重復區的親和純化兔多克隆抗體，濃度為200 ?g/ml，適用于IP和WB檢測。其對人及小鼠的跨物種反應性、明確的IP用量（6 ?g/mg裂解物）及寬范圍WB稀釋度（1:2000–1:10,000）使其成為轉錄調控、RNA聚合酶功能分析及蛋白互作研究的可靠工具。使用3-8% Tris-醋酸凝膠進行WB可獲得最佳檢測效果。在需要檢測總RNA聚合酶II表達水平或進行免疫沉淀富集的實驗體系中，該抗體提供了高特異性和高靈敏度的解決方案。