兔抗PALB2抗體親和純化，精準檢測DNA損傷修復核心蛋白

一、產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗PALB2抗體親和純化抗體，貨號：A301-246A是一款以兔為宿主來源、針對人PALB2蛋白的多克隆抗體。該抗體采用抗原親和純化工藝制備，以完整IgG形式提供，濃度高達1000 ?g/ml（1 mg/ml），未偶聯任何標記物，適用于免疫沉淀及免疫印跡實驗。其高濃度設計特別適合需要大量抗體的IP及染色質免疫沉淀等應用場景。

二、靶點信息：PALB2（BRCA2伴侶與定位蛋白）

PALB2（Partner and localizer of BRCA2）是BRCA2的關鍵相互作用蛋白，主要功能包括：

促進BRCA2的定位與穩定性：PALB2將BRCA2錨定于DNA損傷位點，并維持其蛋白穩定性

參與DNA損傷應答：在同源重組修復中發揮核心作用，維持染色體穩定性

與FA通路相關：PALB2也稱FANCN，是范可尼貧血（Fanconi anemia）通路的核心組分

臨床意義：PALB2基因的雙等位突變可導致范可尼貧血??；雜合突變則顯著增加乳腺癌易感性。因此，PALB2是腫瘤遺傳學及DNA損傷修復研究的重要靶點。

別稱：FANCN、PNCA3

三、免疫原與特異性

本抗體識別的表位位于人PALB2蛋白第200至250位氨基酸殘基之間（參考序列NP_078951.2，GeneID 79728）。該區域位于PALB2蛋白的N末端附近，遠離與BRCA2及其他互作蛋白的結合結構域，有助于特異性檢測全長PALB2而不干擾功能結構域的識別。

抗體采用固相載體上固定的表位特異性肽段進行親和純化，確保高特異性和低背景。

四、產品規格與儲存

參數 | 詳情

靶點 | PALB2

反應性 | 人

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

形態 | 全IgG

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純度 | 抗原親和純化

抗原種屬 | 人

濃度 | 1000 ?g/ml

緩沖液 | Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09%疊氮鈉

儲存條件 | 2–8°C

有效期 | 自收貨起1年

濃度測定：采用比爾定律測定免疫球蛋白濃度，其中1 mg/ml IgG在280 nm波長的吸光度為1.4。

緩沖液特點：Tris-檸檬酸-磷酸緩沖體系在pH 7–8范圍內提供穩定的離子環境，有利于抗體長期保存。

五、應用與推薦稀釋度

應用 | 推薦用量/稀釋度 | 備注

免疫沉淀 | 6 ?g/mg 裂解物 | 每毫克總蛋白使用6 ?g抗體

免疫印跡 | 1:2000 – 1:10,000 | 推薦起始稀釋度1:2000

六、免疫印跡操作要點

通用條件：

封閉液及抗體稀釋液：5% Milk-TBST

一抗孵育：過夜（overnight）

細胞裂解液WB檢測：

二抗推薦：山羊抗兔IgG重輕鏈抗體（A120-101P）

免疫沉淀產物WB檢測：

二抗推薦：抗兔IgG輕鏈HRP偶聯抗體

封閉緩沖液添加：5%正常豬血清（貨號S100-020），以降低非特異性背景

七、技術要點與優化建議

1. 高濃度抗體的優勢與使用策略

A301-246A的濃度達1000 ?g/ml，遠高于常規抗體（通常50–200 ?g/ml）。這一特性帶來以下優勢：

IP實驗更經濟：每毫克裂解物僅需6 ?g抗體，即每微升抗體可處理約167 mg裂解物（按1000 ?g/ml計算，6 ?g對應6 ?l抗體）

儲存空間高效：高濃度意味著小體積即可滿足大量實驗需求

靈活稀釋：WB時可大幅稀釋（1:10,000仍有效），減少抗體消耗

注意：初次使用時建議分裝成小份（如10 ?l/管），避免反復取用導致污染或活性下降。雖然產品建議2–8°C儲存且無需冷凍，但長期頻繁使用時分裝保存更為穩妥。

2. 目標蛋白分子量與凝膠選擇

PALB2的分子量約為130–140 kDa（基于氨基酸序列）。在WB檢測中：

推薦使用6-8% SDS-PAGE凝膠或4-12%梯度膠

轉移條件：濕轉建議300 mA恒流2-3小時，或4°C過夜（30 V）

使用PVDF膜時需用甲醇預先活化；NC膜可直接使用，但高分子量蛋白結合效率略低

3. 免疫沉淀的關鍵優化

抗體用量：6 ?g/mg總蛋白裂解物是經驗證的標準用量。由于抗體濃度高（1 ?g/?l），每毫克裂解物僅需添加6 ?l抗體，體積影響小。

裂解液選擇：PALB2參與DNA損傷修復，部分定位于染色質。推薦使用RIPA緩沖液（50 mM Tris pH 8.0, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.5% 脫氧膽酸鈉, 0.1% SDS）或含有300 mM NaCl的NP-40裂解液以有效釋放染色質結合蛋白。

核酸酶處理：由于PALB2與DNA/染色質緊密相關，IP前建議用Benzonase或DNase I處理裂解物（室溫15–30分鐘），以減少DNA介導的非特異性結合。

交聯條件：如需檢測蛋白-蛋白相互作用（如PALB2-BRCA2復合物），可使用1%甲醛進行短暫交聯（10分鐘，室溫），然后用甘氨酸淬滅，以穩定復合物。

4. 二抗選擇的關鍵考量

在檢測IP產物的WB時，常規抗兔IgG二抗會同時識別抗體的重鏈（~55 kDa）和輕鏈（~25 kDa）。PALB2分子量為130-140 kDa，遠大于重鏈和輕鏈，因此重鏈信號不會直接干擾目標條帶。然而，產品信息仍建議使用輕鏈特異性HRP二抗并添加5%正常豬血清，這一策略可顯著降低背景，提高信噪比，尤其適用于檢測低豐度PALB2的IP樣本。

5. 疊氮鈉的注意事項

緩沖液中含有0.09%疊氮鈉作為防腐劑。如計劃對抗體進行偶聯標記（如生物素或HRP），需注意疊氮鈉會抑制標記反應，建議使用前通過透析（使用PBS，4°C過夜）或脫鹽柱去除。