兔抗RIF1親和純化抗體，三應用全覆蓋，一抗多用簡化流程

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗體為兔源多克隆抗體（貨號：A300-569A），特異性靶向RIF1（Rap1相互作用因子1）蛋白的C末端區域（第2422位至C末端之間）。RIF1是一種多功能蛋白，參與端粒功能調節、S期檢查點調控以及DNA雙鏈斷裂（DSB）損傷應答，其損傷誘導的焦點形成完全依賴于ATM激酶。該抗體經抗原親和純化，未偶聯標記，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB），反應種屬為人。以下將從基本參數、免疫原信息、應用條件、儲存穩定性及生物學背景等方面進行詳細說明。

一、關鍵規格參數

項目 | 詳細內容

靶標 | RIF1 (Rap1 Interacting Factor 1)

反應種屬 | 人類

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 對應人RIF1蛋白第2422位至C末端（第2472位）之間的表位（參考序列NP_060621.3，GeneID 55183）

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純化方式 | 抗原親和純化（使用固定化的RIF1特異性表位）

抗原物種 | 人

濃度 | 1000 ?g/mL

緩沖液 | Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7~8，含0.09%疊氮鈉

儲存條件 | 2–8 °C

保質期 | 收貨后1年

生產流程 | 親和純化后，通過Beer定律測定IgG濃度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值為1.4）

> 注：0.09%疊氮鈉作為防腐劑，在IP后WB使用HRP標記二抗時需注意其抑制作用。建議在IP洗脫或二抗孵育前充分去除疊氮鈉。

二、免疫原與特異性

本抗體的表位定位于人RIF1蛋白的C末端區域（第2425至2472位氨基酸）。通過固相載體上固定的特異性表位進行親和純化，確?？贵w識別天然及變性的RIF1。該C末端區域在哺乳動物中相對保守，但經驗證本抗體主要識別人源RIF1，對小鼠反應性未標注（規格中僅列Human）。親和純化步驟有效去除了針對其它表位的交叉反應抗體，降低背景。實際實驗中建議以陽性對照（如HEK293或HeLa細胞裂解液）確認信號。RIF1分子量較大（約270-280 kDa），WB中呈現為高分子量條帶。

三、推薦應用與實驗條件

以下稀釋度均為起始推薦范圍，用戶需根據具體實驗體系進行優化。

1. 免疫印跡（Western Blot, WB）

稀釋度：1:1000 – 1:5000  

凝膠建議：推薦使用3-8% Tris-醋酸（Tris-acetate）凝膠，以有效分離高分子量蛋白（~280 kDa）。常規Tris-甘氨酸凝膠對大于250 kDa的蛋白分辨率較差。  

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（Tris緩沖鹽水+0.1% Tween-20）  

孵育條件：一抗4°C孵育過夜（推薦）  

二抗推薦：  

常規細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體，如貨號A120-101P。  

免疫沉淀后WB：為避免變性IP產物中重鏈（~55 kDa）信號干擾，推薦使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP標記二抗，并在封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景。  

陽性對照：HEK293、HeLa細胞裂解液。建議同時使用過表達RIF1的細胞系作為強陽性對照。

2. 免疫組織化學（IHC）

稀釋度：1:1000 – 1:5000  

抗原修復：對FFPE（福爾馬林固定、石蠟包埋）組織切片，必須使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復。  

推薦對照：使用兔IgG同型對照作為陰性對照，以陽性組織（如睪丸、多種腫瘤組織）確認染色特異性。  

檢測系統：適用于顯色法（DAB）或熒光法IHC。RIF1在細胞核中定位。

3. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗體 / mg總蛋白裂解液  

操作建議：  

裂解液推薦使用非變性裂解緩沖液（如NP-40或RIPA，避免高濃度SDS），以維持RIF1與相互作用蛋白（如Rap1、ATM等）的結合。  

孵育條件：4°C旋轉孵育2小時或過夜。  

使用Protein A/G瓊脂糖或磁珠捕獲免疫復合物。  

洗脫后通過WB檢測，務必使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗以避免重鏈干擾。  

陽性對照：過表達RIF1的細胞裂解液或內源性表達較高的細胞（如HeLa、HEK293）。

> 注：本產品未驗證用于ICC-IF，用戶需自行探索。

四、產品特性與質量控制

純化工藝：采用表位特異性親和純化，較常規蛋白A/G純化具有更高的特異性，顯著降低非特異性背景。C末端表位（2425-2472）的選擇避免了與其它DNA損傷應答蛋白（如53BP1、Rap1）的同源區，提升靶向性。  

濃度與效價：濃度高達1000 ?g/mL，IHC最高稀釋達1:5000，WB達1:5000，經濟性良好。  

功能驗證：每批抗體均通過WB檢測多種人細胞裂解液中的內源性RIF1（~280 kDa），確認單一條帶位置正確。同時通過IP驗證其捕獲內源性RIF1及下游復合物的能力。  

大蛋白檢測優化：規格中特別建議使用3-8% Tris-acetate凝膠，避免了常規凝膠系統對大分子量蛋白轉移效率低、條帶彌散的問題。  

批次間一致性：生產記錄完整，遵循內部QC標準，符合ISO 9001質量管理體系（母公司Fortis Life Sciences）。  

優勢總結：  

三應用驗證（IHC、IP、WB） → 一抗多用  

明確大分子量WB條件（Tris-acetate凝膠） → 減少優化時間  

IP用量明確（6 ?g/mg裂解液） → 節省摸索成本  

輕鏈專用二抗配套方案 → IP-WB無重鏈干擾  

長效穩定儲存（2-8°C） → 即用型方便  

五、儲存與穩定性

儲存溫度：2–8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體變性、效價下降。  

運輸條件：濕冰運輸，收貨后請立即按上述溫度保存。  

分裝建議：若需長期使用，建議分裝成小份后存放于2–8°C，避免污染。不可稀釋后長期儲存。  

有效期：自收貨之日起1年。過期產品可能信號減弱，建議重新訂購。