兔抗DDB1抗體親和純化，IP-WB無縫銜接，徹底消除重鏈干擾

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗體為兔源多克隆抗體（貨號：A300-462A），特異性靶向DDB1（DNA損傷結合蛋白1）的C末端區域（第1090位至C末端之間）。DDB1是UV損傷DNA結合蛋白復合物（DDB）的大亞基（p127），也是Cullin 4（Cul4）泛素連接酶復合物的核心組分，通過組蛋白泛素化及染色質結合因子調控參與核苷酸切除修復（NER）和染色質重塑。該抗體經抗原親和純化，未偶聯標記，適用于免疫組織化學（IHC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB），且與人、小鼠樣本有交叉反應性。以下將從基本參數、免疫原信息、應用條件、儲存穩定性及生物學背景等方面進行詳細說明。

一、關鍵規格參數

項目 | 詳細內容

靶標 | DDB1 (DNA Damage Binding Protein 1)

反應種屬 | 小鼠、人類

宿主 | 兔

克隆性 | 多克隆

抗體形式 | 完整IgG

免疫原 | 對應人DDB1蛋白第1090位至C末端（第1140位）之間的表位（參考序列TrEMBL Q13289，GeneID 1642）

亞型 | IgG

偶聯物 | 未偶聯

純化方式 | 抗原親和純化（使用固定化的DDB1特異性表位）

抗原物種 | 人

濃度 | 200 ?g/mL

緩沖液 | Tris-緩沖鹽水，含0.1% BSA和0.09%疊氮鈉

儲存條件 | 2–8 °C

保質期 | 收貨后1年

生產流程 | 親和純化后，通過Beer定律測定IgG濃度（1 mg/mL IgG在A280下吸光值為1.4）

> 注：本品濃度較低（200 ?g/mL），且緩沖液中含0.1% BSA作為穩定蛋白，使用時應根據實驗需求選擇適當的稀釋度。含BSA的抗體通常背景更低，但用于IP時BSA可能輕微競爭，不影響大多數應用。疊氮鈉（0.09%）作為防腐劑，使用HRP二抗時需注意去除。

二、免疫原與特異性

本抗體的表位定位于人DDB1蛋白的C末端區域（第1100至1140位氨基酸）。通過固相載體上固定的特異性表位進行親和純化，確?？贵w識別天然及變性的DDB1。經內部驗證，該抗體可檢測人源和小鼠源DDB1，不與其他DDB復合物組分（如DDB2）或Cul4復合物中其他蛋白發生顯著交叉反應。實際實驗中建議以陽性對照（如HEK293或HeLa細胞裂解液）確認信號。DDB1分子量約為127 kDa，在WB中呈現為清晰條帶。

三、推薦應用與實驗條件

以下稀釋度均為起始推薦范圍，用戶需根據具體實驗體系進行優化。

1. 免疫印跡（Western Blot, WB）

稀釋度：1:2000 – 1:10,000  

封閉液及抗體稀釋液：5%脫脂奶粉-TBST（Tris緩沖鹽水+0.1% Tween-20）  

孵育條件：一抗4°C孵育過夜（推薦）  

二抗推薦：  

常規細胞裂解液WB：使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）抗體，如貨號A120-101P。  

免疫沉淀后WB：為避免變性IP產物中重鏈（~55 kDa）信號干擾，推薦使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP標記二抗，并在封閉液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景。  

陽性對照：HEK293、HeLa或小鼠胚胎成纖維細胞裂解液。DDB1表達廣泛，幾乎在所有細胞系中均可檢測。

2. 免疫組織化學（IHC）

稀釋度：1:500 – 1:2000  

抗原修復：對FFPE（福爾馬林固定、石蠟包埋）組織切片，必須使用pH 6.0的檸檬酸鹽緩沖液進行熱誘導抗原修復。  

推薦對照：使用兔IgG同型對照作為陰性對照，以陽性組織（如皮膚、肝臟、多種腫瘤組織）確認染色特異性。DDB1主要定位于細胞核。  

檢測系統：適用于顯色法（DAB）或熒光法IHC。

3. 免疫沉淀（IP）

用量：6 ?g抗體 / mg總蛋白裂解液（因濃度200 ?g/mL，相當于30 ?L抗體/mg裂解液，請相應調整體積）  

操作建議：  

裂解液推薦使用非變性裂解緩沖液（如NP-40或RIPA，避免高濃度SDS），以維持DDB1與Cul4復合物及底物的相互作用。  

孵育條件：4°C旋轉孵育2小時或過夜。  

使用Protein A/G瓊脂糖或磁珠捕獲免疫復合物。  

洗脫后通過WB檢測，務必使用抗兔IgG輕鏈特異性二抗以避免重鏈干擾。  

陽性對照：過表達DDB1的細胞裂解液或內源性表達較高的細胞（如HeLa、HEK293）。

> 注：本產品未驗證用于ICC-IF，用戶需自行探索。

四、產品特性與質量控制

純化工藝：采用表位特異性親和純化，較常規蛋白A/G純化特異性更高，降低非特異性背景。C末端表位（1100-1140）的選擇避免了與DDB2或其他WD40重復蛋白的同源區，提升靶向性。  

濃度與效價：濃度為200 ?g/mL，雖然較其他產品（1000 ?g/mL）低，但WB推薦稀釋比仍達1:2000~1:10,000，意味著每微升抗體可制備2-10 mL工作液，性價比良好。  

緩沖液優化：含0.1% BSA，可穩定低濃度抗體，減少管壁吸附，同時降低IHC和WB中的非特異性背景。  

功能驗證：每批抗體均通過WB檢測多種細胞裂解液中的內源性DDB1（~127 kDa），確認單一條帶正確。同時通過IP驗證其捕獲內源性DDB1及CRL4復合物的能力。  

批次間一致性：生產記錄完整，遵循內部QC標準，符合ISO 9001質量管理體系（母公司Fortis Life Sciences）。  

五、儲存與穩定性

儲存溫度：2–8°C，嚴禁冷凍。反復凍融會導致抗體變性、效價下降。  

運輸條件：濕冰運輸，收貨后請立即按上述溫度保存。  

分裝建議：由于濃度較低且含BSA，不建議進一步稀釋分裝；原瓶保存即可，避免污染。  

有效期：自收貨之日起1年。過期產品可能信號減弱，建議重新訂購。