兔抗CARM1抗體親和純化，全應用驗證型精準檢測方案

在蛋白質翻譯后修飾與轉錄調控研究中，精氨酸甲基化是一類關鍵調節機制。CARM1（coactivator-associated arginine methyltransferase 1，也稱PRMT4）作為Ⅰ型精氨酸甲基轉移酶，催化組蛋白和非組蛋白的精氨酸不對稱二甲基化，參與轉錄共激活、RNA剪接及核受體信號通路。針對CARM1的高質量抗體是實現免疫印跡、免疫沉淀及組織化學分析的必備工具。以下提供一款由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔源抗CARM1多克隆抗體（全IgG，抗原親和純化）（貨號：A300-421A）的完整技術規格、應用條件與操作要點，供科研人員參考。

一、產品核心規格

靶點：CARM1 / PRMT4（人/小鼠反應性）  

宿主/克隆性：兔 / 多克隆  

抗體形式：全IgG，未偶聯  

免疫原：人CARM1蛋白第558位至C末端（第585位）之間的特異性表位，具體識別區域位于550–585（參考SwissProt Q86X55，GeneID 10498）  

純化方式：抗原親和純化——將該表位固定于固相載體，從抗血清中特異性捕獲目標抗體  

濃度：1000 ?g/ml（高濃度配方，以比爾定律測定，1 mg/ml IgG在280 nm處吸光度為1.4）  

緩沖液：Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液，pH 7–8，含0.09% 疊氮鈉  

儲存與效期：2–8°C，自收貨起1年內穩定  

該抗體經抗原親和純化后，去除了血清中非特異性IgG及其他雜蛋白，顯著降低免疫印跡和免疫沉淀中的背景交叉反應。高濃度（1 mg/ml）配方便于靈活稀釋，尤其適合需要高靈敏度的實驗（如超低稀釋比WB）。

二、應用性能與推薦條件

1. 免疫印跡（Western Blot，WB）

稀釋范圍：1:10,000 – 1:25,000（極寬高稀釋比，突出高濃度優勢）  

封閉及抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶-TBST  

一抗孵育：推薦4°C過夜  

二抗注意事項：  

檢測細胞裂解液時，可使用山羊抗兔IgG（重鏈+輕鏈）二抗（如A120-101P）。  

檢測免疫沉淀后的樣品時，為避免變性條件下IgG重鏈（約55 kDa）與CARM1（約66 kDa）信號重疊，建議使用抗兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，同時可在封閉液中添加5%正常豬血清（如Cat. No. S100-020）以進一步抑制非特異性結合。

在1:10,000–1:25,000的稀釋范圍內，該抗體可清晰識別HEK293、HeLa、小鼠組織等樣本中內源性CARM1條帶（約66 kDa），背景極低。

2. 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）

推薦用量：6 ?l 抗體 / mg 總蛋白裂解液（注意：由于抗體濃度為1000 ?g/ml，6 ?l相當于6 ?g抗體）  

適用樣本：人或小鼠細胞/組織裂解物  

作為親和純化的多克隆抗體，該抗體識別CARM1 C末端區域（558–585）的多個表位，免疫沉淀效率高，能有效富集內源性CARM1及其相互作用蛋白（如剪接因子CA150、p160家族共激活因子等）。沉淀后的產物可采用WB驗證，配合輕鏈特異性二抗可避免重鏈干擾。

3. 免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC）

稀釋范圍：1:500 – 1:2000  

抗原修復：強烈推薦使用枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導表位修復  

樣本類型：福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片  

在優化條件下，該抗體可對人及小鼠組織（如睪丸、乳腺、腦組織）中CARM1進行特異性定位分析。CARM1在細胞中主要定位于細胞核，IHC染色應呈現清晰的核信號。

三、儲存與操作注意事項

儲存：2–8°C，切勿冷凍，反復凍融會導致蛋白活性下降。高濃度抗體（1 mg/ml）在冷藏條件下穩定性極佳。  

防腐劑：疊氮鈉（0.09%）可抑制細菌生長，若后續實驗涉及細胞培養或需去除疊氮鈉，請提前用PBS透析。  

分裝建議：由于濃度高，建議無菌分裝為小份（如10–20 ?l）于2–8°C保存，避免反復取用污染；不可冷凍。  

抗體在Tris-檸檬酸-磷酸緩沖液（pH 7–8）中穩定性良好，效期內濃度及活性保持不變。

四、CARM1靶點背景與研究意義

CARM1（coactivator-associated arginine methyltransferase 1，也稱PRMT4）是蛋白質精氨酸甲基轉移酶（PRMT）家族的重要成員。其催化組蛋白H3第17位精氨酸（H3R17）和第26位精氨酸（H3R26）的不對稱二甲基化，以及多種非組蛋白底物（如p300/CBP、CA150、NF-κB p65、雄激素受體）的甲基化。主要功能包括：

轉錄共激活：CARM1與p160家族共激活因子（如SRC-1）協同作用，增強核受體（如雄激素受體、雌激素受體）介導的基因轉錄。  

RNA剪接調控：CARM1甲基化剪接因子CA150，連接轉錄延伸與剪接過程；CARM1功能異常與脊髓性肌萎縮癥（spinal muscular atrophy）發病機制相關。  

免疫與炎癥：作為NF-κB通路的共激活因子，CARM1甲基化p65亞基，促進炎癥相關基因表達。  

癌癥相關性：CARM1在前列腺癌、乳腺癌等多種腫瘤中過表達，參與腫瘤細胞增殖、侵襲及耐藥。

因此，高特異性抗CARM1抗體可用于：

精氨酸甲基化相關信號通路研究；

核受體共激活復合物的免疫沉淀-質譜分析；

腫瘤組織芯片中CARM1表達的IHC評估；

剪接調控機制研究（結合CLIP-seq或RIP-seq）。