昆蟲細胞無血清懸浮生長培養基使用方法詳細說明

昆蟲細胞無血清懸浮生長培養基--這種產品是無血清的、完全懸浮的細胞培養基，適用于各種細胞系，支持高密度細胞生長。它具有兩倍的時間、高活力和與廣泛的細胞類型兼容的特點。當與Bac到Bac昆蟲細胞表達系統結合使用時，它可以在HiFive和SF9昆蟲細胞中高效和穩定地表達多種蛋白質。與Bac和SF9細菌桿狀病毒表達系統結合，可以有效和穩定地在HiFivea和SF9害蟲細胞中表達多種蛋白質。

艾美捷昆蟲細胞無血清懸浮生長培養基基本參數：

貨號：A-EXO005

規格：500mL, 1000mL

保存條件: 4℃避光保存；保質期 12 個月。

昆蟲細胞無血清懸浮生長培養基使用方法：

昆蟲懸浮細胞培養環境

細胞培養條件：溫度曲線：27℃±0.5℃、濕度曲線：70%±20%、無需 CO2、120rpm（振幅：25）。培養過

程中需注意以下三點：

1） 保證搖床 24 小時正常運轉；

2） 防止外界環境溫度過高，導致培養箱內溫度失控；

3） 防止培養箱內水盤缺水，導致培養箱內濕度過低。

培養基適應

1. 直接適應：最初培養階段，Hi Five 細胞按初始密度 0.5×10⁶ cells/mL 接種，SF9 細胞按初始密度 1.0×10⁶cells/mL 接種，直接將培養基更換為昆蟲細胞無血清懸浮生長培養基 (A-EXO005) 進行培養。待細胞培養 2-3代，且生長穩定后進行后續實驗。Hi Five 細胞穩定生長時按 0.5×10⁶cells/mL 密度接種，SF9 細胞穩定生長時按 1.0×10⁶cells/mL 密度接種，培養 72h 后均可達到 5-7×10⁶ cells/mL，細胞活率≥90%。

2. 間接適應：A-EXO005 培養基與細胞原培養基 1：1 混合培養細胞，連續傳 2-3 代，細胞穩定生長后可將培

養基更換為 A-EXO005 培養基，再傳 2-3 代，細胞生長穩定后進行后續實驗。Hi Five 細胞穩定生長時按 0.5×10⁶ cells/mL 密度接種，SF9 細胞穩定生長時按 1.0×10⁶cells/mL 密度接種，培養 72h 后均可達到 5-7×10⁶cells/mL，細胞活率≥90%。

3. 注意事項：

3.1. 根據細胞具體情況選擇進行培養基直接適應或者間接適應。

3.2 細胞馴化初期，若出現密度低、結團等不穩定狀態，根據密度選擇合適的傳代方式。

a. 稀釋傳代：根據細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，去除多余細胞懸液并補加新鮮培養基。

b. 離心傳代：根據細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，800rpm（114g）離心 5min，去除上清，用新鮮

培養基重懸細胞。

4. 細胞正常狀態傳代：

昆蟲懸浮細胞復蘇：

1. 預熱培養基：取 20mL 的對應培養基置于 27℃預熱，保證預熱充分。

2. 將凍存管從液氮罐或-80℃冰箱中取出，迅速轉移至 37℃水浴中，快速搖晃，直至完全融化。

3. 取預熱好的培養基 5mL 于無菌離心管中，并將解凍后的細胞懸液移入此離心管中。800rpm 離心 5min（除去凍存液中 DMSO）。

4. 離心后棄去上清，用 15mL 預熱好的培養基（保證較高細胞密度）重懸細胞，移至相應搖瓶，放于培養箱中

懸浮培養。

昆蟲懸浮細胞傳代：

1. Hi Five 細胞復蘇初期傳代：

細胞復蘇后前兩代，如果細胞密度＞2×10⁶ cells/mL，取部分細胞懸液離心傳代，按初始密度 0.8×10⁶ cells/mL接種；如果細胞密度≤2×10⁶ cells/mL，進行全部離心換液（細胞剛復蘇會有細胞碎片，屬正?，F象）。

2. SF9 細胞復蘇初期傳代：

復蘇后 2-3 天取樣計數，若細胞密度＜2×10⁶cells/mL 以下，細胞不做任何處理，繼續培養 2-3 天（復蘇后 4-6天），取樣計數，若細胞密度 2-5×10⁶cells/mL，直接向搖瓶中加入新鮮培養基將細胞密度調整至 1×10⁶cells/mL左右，切忌不要離心傳代，繼續培養，若細胞密度＞5×10⁶cells/mL，可正常稀釋傳代。

3. Hi Five 活細胞初期傳代：

收到細胞后，將細胞轉移至搖瓶中，取樣計數并查看細胞狀態，如果細胞密度＞2×10⁶ cells/mL，可以稀釋傳代，按 0.8×10⁶ cells/mL 接種；如果細胞密度≤2×10⁶ cells/mL，建議全部離心傳代。（細胞經歷運輸過程會有細胞碎片，屬正?，F象）。

4. SF9 活細胞初期傳代：

收到細胞后，將細胞轉移至搖瓶中，取樣計數并查看細胞狀態，如果細胞密度≥5×10⁶ cells/mL，可以稀釋傳代，按 2×10⁶ cells/mL 接種；如果細胞密度＜5×10⁶ cells/mL，繼續培養 1-4 天，此期間需每 24h 取樣計數查看細胞狀態，當細胞密度≥5×10⁶ cells/mL，按 2×10⁶ cells/mL 接種，稀釋傳代，直至細胞恢復正常狀態后，按1×10⁶ cells/mL 接種。（細胞經歷運輸過程會有細胞碎片，屬正?，F象）。

昆蟲懸浮細胞凍存：

1. 待細胞恢復至正常狀態后，擴大細胞培養體積準備凍存建庫。盡量多建細胞庫，保證備份充足。

2. 含血清凍存：選擇處于對數生長期、活率＞90%細胞進行凍存，凍存細胞密度：15-20×10⁶ cells/mL，推薦20×10⁶ cells/mL。

無血清凍存：選擇處于對數生長期、活率＞90%細胞進行凍存，凍存細胞密度：30-40×10⁶ cells/mL，推薦40×10⁶ cells/mL。

3. 準備凍存盒：向程序降溫盒注入適量異丙醇，置于 4℃冰箱預冷。

4. 含血清細胞凍存液配制：凍存液=40%新鮮培養基+50%FBS（建議使用進口胎牛血清）+10%DMSO，凍存液配好后置于 4℃冰箱預冷。

無血清細胞凍存液配制：凍存液=45%新鮮培養基+45%細胞培養上清+10%DMSO，凍存液配好后置于 4℃冰箱預冷。

凍存液配制時，先加培養基再加血清或 DMSO，防止 DMSO 濃度過高導致血清有效成分變性。

5. 取細胞懸液，800rpm 離心 5min，棄去上清，用適量細胞凍存液重懸細胞，調整細胞密度至目標值。

6. 快速分裝細胞液至凍存管中。

7. 將凍存管放入程序降溫盒中，放于-80℃冰箱，24h 后轉至液氮罐中儲存。一段時間后復蘇檢測。

該試劑僅用于科學研究領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

Biogradetech生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的供應商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。