Biogradetech：Insect cell culture medium, serum-free (suspension culture) 昆蟲細胞無血清懸浮生長培養基

昆蟲細胞懸浮培養在生物學研究和應用中具有重要的生物學意義。比如： 

1.蛋白質表達和生產：昆蟲細胞懸浮培養可用于大規模生產重組蛋白。昆蟲細胞具有較高的蛋白質表達能力，并且能夠正確地折疊和糖基化蛋白質。這使得昆蟲細胞懸浮培養成為生產生物藥物和研究蛋白質功能的重要工具。 

2.病毒研究：昆蟲細胞懸浮培養可以用于病毒的研究和生產。某些昆蟲細胞對于特定的昆蟲病毒具有高度敏感性和感染性，這使得它們成為研究病毒感染機制、病毒生命周期以及病毒抗性的理想模型。 

3.細胞生物學研究：昆蟲細胞懸浮培養可用于研究細胞生物學過程，如細胞分裂、細胞凋亡、細胞遷移和細胞信號傳導等。通過對昆蟲細胞的觀察和實驗操作，可以深入了解細胞的結構、功能和調控機制。 

4.毒理學研究：昆蟲細胞懸浮培養可用于評估化合物的毒性和安全性。通過將化合物暴露給昆蟲細胞，可以評估其對細胞的影響，如細胞存活率、細胞毒性和細胞損傷等。這有助于篩選和評估化合物的毒性潛力，并為藥物發現和環境毒理學提供重要信息。    

總之，昆蟲細胞懸浮培養在生物學研究中具有廣泛的應用，可以用于蛋白質生產、病毒研究、細胞生物學研究和毒理學研究等領域。它們為我們理解生物學過程、開發新藥物和評估化合物的安全性提供了有價值的工具和平臺。   

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A-EXO005本產品是一款昆蟲細胞通用型無血清全懸浮培養基，可支持多種昆蟲細胞高密度生長，具有倍增時間短、活率高、適用昆蟲細胞種類廣等特點。搭配Bac-to-Bac昆蟲桿狀病毒表達系統，在Hi Five昆蟲細胞中可高效穩定表達多種蛋白。 

培養基使用方法

昆蟲懸浮細胞培養環境

細胞培養條件：溫度曲線：27℃±0.5℃、濕度曲線：70%±20%、無需CO₂、120rpm（振幅：25）。培養過程中需注意以下三點：

1） 保證搖床24小時正常運轉； 

2） 防止外界環境溫度過高，導致培養箱內溫度失控； 

3） 防止培養箱內水盤缺水，導致培養箱內濕度過低。

培養基適應

1.直接適應：最初培養階段，Hi Five細胞按初始密度0.5×10⁶cells/mL接種，SF9細胞按初始密度1.0×10⁶cells/mL接種，直接將培養基更換為昆蟲細胞無血清懸浮生長培養基 (A-EXO005) 進行培養。待細胞培養2-3代，且生長穩定后進行后續實驗。Hi Five細胞穩定生長時按0.5×10⁶cells/mL密度接種，SF9細胞穩定生長時按1.0×10⁶cells/mL密度接種，培養72h后均可達到5-7×10⁶ cells/mL，細胞活率≥90%。 

2.間接適應：A-EXO005培養基與細胞原培養基1：1混合培養細胞，連續傳2-3代，細胞穩定生長后可將培養基更換為A-EXO005培養基，再傳2-3代，細胞生長穩定后進行后續實驗。Hi Five細胞穩定生長時按0.5×10⁶cells/mL密度接種，SF9細胞穩定生長時按1.0×10⁶cells/mL密度接種，培養72h后均可達到5-7×10⁶cells/mL，細胞活率≥90%。 

3.注意事項： 

3.1. 根據細胞具體情況選擇進行培養基直接適應或者間接適應。 

3.2 細胞馴化初期，若出現密度低、結團等不穩定狀態，根據密度選擇合適的傳代方式。 

a.稀釋傳代：根據細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，去除多余細胞懸液并補加新鮮培養基。 

b.離心傳代：根據細胞密度計算傳代時所需細胞懸液，800rpm（114g）離心5min，去除上清，用新鮮培養基重懸細胞。 

4.細胞正常狀態傳代：

不同計數方式可能存在差異，建議使用Countstar細胞計數儀。 

昆蟲懸浮細胞復蘇：

預熱培養基：取20mL的對應培養基置于27℃預熱，保證預熱充分。

將凍存管從液氮罐或-80℃冰箱中取出，迅速轉移至37℃水浴中，快速搖晃，直至完全融化。

取預熱好的培養基5mL于無菌離心管中，并將解凍后的細胞懸液移入此離心管中。800rpm離心5min（除去凍存液中DMSO）。

離心后棄去上清，用15mL預熱好的培養基（保證較高細胞密度）重懸細胞，移至相應搖瓶，放于培養箱中懸浮培養。

昆蟲懸浮細胞傳代：

1.Hi Five細胞復蘇初期傳代：

細胞復蘇后前兩代，如果細胞密度＞2×10⁶ cells/mL，取部分細胞懸液離心傳代，按初始密度0.8×10⁶ cells/mL接種；如果細胞密度≤2×10⁶ cells/mL，進行全部離心換液（細胞剛復蘇會有細胞碎片，屬正?，F象）。

2.SF9細胞復蘇初期傳代：

復蘇后2-3天取樣計數，若細胞密度＜2×10⁶cells/mL以下，細胞不做任何處理，繼續培養2-3天（復蘇后4-6天），取樣計數，若細胞密度2-5×10⁶cells/mL，直接向搖瓶中加入新鮮培養基將細胞密度調整至1×10⁶cells/mL左右，切忌不要離心傳代，繼續培養，若細胞密度＞5×10⁶cells/mL，可正常稀釋傳代。

3.Hi Five活細胞初期傳代：

收到細胞后，將細胞轉移至搖瓶中，取樣計數并查看細胞狀態，如果細胞密度＞2×10⁶ cells/mL，可以稀釋傳代，按0.8×10⁶ cells/mL接種；如果細胞密度≤2×10⁶ cells/mL，建議全部離心傳代。（細胞經歷運輸過程會有細胞碎片，屬正?，F象）。

4.SF9活細胞初期傳代：

收到細胞后，將細胞轉移至搖瓶中，取樣計數并查看細胞狀態，如果細胞密度≥5×10⁶ cells/mL，可以稀釋傳代，按2×10⁶ cells/mL接種；如果細胞密度＜5×10⁶ cells/mL，繼續培養1-4天，此期間需每24h取樣計數查看細胞狀態，當細胞密度≥5×10⁶ cells/mL，按2×10⁶ cells/mL接種，稀釋傳代，直至細胞恢復正常狀態后，按1×10⁶ cells/mL接種。（細胞經歷運輸過程會有細胞碎片，屬正?，F象）。   

昆蟲懸浮細胞凍存：

1.待細胞恢復至正常狀態后，擴大細胞培養體積準備凍存建庫。盡量多建細胞庫，保證備份充足。

2.含血清凍存：選擇處于對數生長期、活率＞90%細胞進行凍存，凍存細胞密度:15-20×10⁶cells/mL，推薦20×10⁶ cells/mL。

無血清凍存：選擇處于對數生長期、活率＞90%細胞進行凍存，凍存細胞密度:30-40×10⁶ cells/mL，推薦40×10⁶ cells/mL。

3.準備凍存盒：向程序降溫盒注入適量異丙醇，置于4℃冰箱預冷。

4.含血清細胞凍存液配制：凍存液=40%新鮮培養基+50%FBS(建議使用進口胎牛血清)+10%DMSO，凍存液配好后置于4℃冰箱預冷。

無血清細胞凍存液配制：凍存液=45%新鮮培養基+45%細胞培養上清+10%DMSO，凍存液配好后置于4℃冰箱預冷。

凍存液配制時，先加培養基再加血清或DMSO，防止DMSO濃度過高導致血清有效成分變性。

5.取細胞懸液，800rpm離心5min，棄去上清，用適量細胞凍存液重懸細胞，調整細胞密度至目標值。

6.快速分裝細胞液至凍存管中。

7.將凍存管放入程序降溫盒中，放于-80℃冰箱，24h后轉至液氮罐中儲存。一段時間后復蘇檢測。

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Biogradetech是全球生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的領先供應商。他們提供廣泛的產品組合，包括細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域的試劑。Biogradetech的產品受到全球生物研究機構和生物制藥公司的高度追捧，他們以高質量、可靠性和服務而聞名。 Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。其產品均在嚴格的全球標準下生產，Biogradetech還提供專業的技術支持，幫助客戶選擇正確的產品，并正確使用產品。Biogradetech致力于為客戶提供高質量的產品和服務，是那些尋求高質量試劑和可靠結果的人值得信賴的合作伙伴。 為了更好地滿足亞太地區客戶的需求并提升交付速度，Biogradetech在香港設立現貨中心，將能更迅速地滿足客戶的需求，確保訂單的高效處理，并加速產品的交付和配送，從而提供更快速、可靠的服務。   

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