ALPCO胰島素ELISA：樣本處理&試劑準備&結果計算

ALPCO胰島素ELISA是一種夾心型免疫測定法。96孔微孔板涂有胰島素特異性單克隆抗體。將標準品、對照品和樣品加入帶有檢測抗體的微孔板孔中。然后將微孔板在酰胺板振蕩器上以700-900rpm的速度孵育。第一次孵育完成后，用洗滌緩沖液洗滌孔并吸干。加入TMB底物，在微孔板振蕩器上以700-900rpm的速度第二次孵育微孔板。一旦第二次孵育完成，加入停止溶液，用分光光度計在450nm處測量光密度（OD）。產生的顏色強度與樣品中胰島素的量成正比。

ALPCO胰島素ELISA用于定量測定血清和血漿中的胰島素。

艾美捷胰島素ELISA（ALP-80-INSHU-E01.1）供應的材料：

*請參閱每個試劑盒隨附的分析證書，了解批次特定的控制范圍和復溶量。

儲存條件：

試劑盒應儲存在2-8°C的條件下。試劑盒在盒子標簽上的有效期之前是穩定的。

樣本處理：

血清和血漿（肝素或EDTA）樣本適用于此測定。不需要對樣本進行稀釋或處理。然而，如果樣本的胰島素濃度高于最高標準，應將樣本在零標準中稀釋，然后重復分析。樣本可以在分析前在2-8°C下儲存24小時。建議在-20°C以下儲存更長時間。避免反復凍融。建議在使用前1）徹底渦旋每個樣本，2）在不停頓的情況下進行移液操作。

試劑準備：

所有試劑在使用前必須平衡至室溫，然后用于測定的準備和后續使用。洗滌緩沖液濃縮液需用20份蒸餾水稀釋。例如，要準備工作強度洗滌緩沖液，用400毫升去離子水稀釋20毫升洗滌緩沖液濃縮液（21倍）。工作強度洗滌緩沖液在室溫（18-25°C）下穩定4周。

糖尿病控制品（1級和2級）以凍干形式提供。請參考隨每個試劑盒提供的分析證書，了解適當的去離子水體積用于復溶。用橡膠塞和蓋子封閉小瓶，輕輕搖晃小瓶，使用前讓其靜置30分鐘。小瓶中的內容物應完全溶解，無可見顆粒。復溶的控制品在2-8°C下儲存7天穩定。如果需要，控制品可以分裝后在-20°C以下儲存長達6個月?？刂破凡粦磸蛢鋈凇?/p>

質量控制：

建議在每次測定中包含ALPCO胰島素ELISA提供的控制品。控制品的濃度范圍在每個試劑盒提供的分析證書上提供；然而，建議每個實驗室建立自己的可接受范圍。

所需材料：

- 用于分配25 - 100微升的精密移液管（帶一次性吸頭）

- 用于分配100微升的可重復或多通道移液管

- 用于試劑配制的容量瓶和移液管

- 用于試劑配制的蒸餾水或去離子水

- 微孔板洗滌器或洗滌瓶

- 能夠達到700-900轉/分鐘的微孔板振蕩器

- 帶有450納米濾光片的微孔板閱讀器

- 用于樣本制備的渦旋混合器。

結果計算：

從標準品構建標準曲線。零標準應作為空白，其平均值應從每個孔中減去。建議使用軟件程序來計算標準曲線并確定樣本的濃度。胰島素ELISA是一種配體結合測定，其反應與分析物濃度呈S形關系。目前公認的此類曲線的參考模型使用4或5參數邏輯（pl）擬合，因為這些模型能在更大范圍內優化準確性和精確度。盡管三次樣條和其他模型是可接受的方法，但它們通常在檢測范圍的低值和高值端顯示出較低的測定內準確性和精確度。

胰島素ELISA文獻參考：

Finlay JWA, Dillard RF. Appropriate Calibration Curve Fitting in Ligand Binding Assays. AAPS Journal. 2007; 9(2): E260-E267.