IBL-小鼠總血管緊張素原檢測試劑盒檢測步驟和原理說明

血管緊張素原（Angiotensinogen）是血管緊張素（Angiotensin）的前體蛋白，可被位于腎臟入球小管旁細胞（JG細胞）分泌的腎素（Renin）酶切割，生成血管緊張素I（Angiotensin I）。隨后，血管緊張素I在血管緊張素轉換酶（ACE）的作用下進一步被切割，生成血管緊張素II（Angiotensin II）。

在腎素-血管緊張素-醛固酮系統（RAAS）中，血管緊張素II具有全身動脈收縮的重要作用，并能刺激腎上腺皮質分泌醛固酮（Aldosterone）。醛固酮促進體內鈉的潴留，從而增加血容量、心輸出量以及外周血管阻力（PVR）。當血壓升高后，腎素的分泌會受到抑制。

過去，常通過檢測血漿腎素活性（PRA）、活性腎素濃度（ARC）或其組合來評估RAAS中腎素的活性，但這些方法未充分考慮體位（如站立或坐位）以及一天內不同時間的變化。根據Kobori等人的研究，提出通過檢測血液中完整型血管緊張素原（Intact Angiotensinogen）和總血管緊張素原（包括被腎素切割后的Des AI Angiotensinogen）的比值，可以獲得更穩定的腎素活性生物標志物。

血管緊張素原的檢測在原發性醛固酮增多癥、新型RAAS抑制劑以及心血管和腎臟血管疾病等研究領域具有重要價值。

近年來，由嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）引起的新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）與RAAS系統（包括ACE抑制劑和血管緊張素受體拮抗劑ARBs）之間的關系也已成為全球研究的熱點。

本試劑盒可定量檢測小鼠血清、血漿及細胞培養上清液中的總血管緊張素原（包括完整型血管緊張素原和被腎素切割后的Des AI血管緊張素原）。

艾美捷IBL-小鼠總血管緊張素原檢測試劑盒：

貨號：27103-96Well

預期用途：研究用試劑

檢測方法：酶聯免疫吸附試驗ELISA.

標記物：辣根過氧化物酶HRP.

適用物種：小鼠

檢測樣本類型：血清、EDTA血漿、細胞培養上清液

※ 根據樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買，詳情請參考說明書。.

檢測范圍：0.16 - 10 ng/mL

第一步反應條件：2 - 8 ℃ 孵育過夜

第二步反應條件：2 - 8 ℃ 孵育60分鐘

靈敏度：0.03 ng/mL

特異性：可特異性檢測小鼠血清、EDTA血漿和細胞培養上清液中的總血管緊張素原。

儲存條件：2 - 8 ℃

包裝規格：96孔板 × 1

試劑盒組成：

1. 預包被板：抗小鼠AGT135.兔IgG親和純化.96孔 × 1

2. 標記抗體濃縮液：30×.HRP標記抗小鼠AGT405.兔IgG Fab’親和純化 0.4 mL × 1

3. 標準品：重組小鼠血管緊張素原.0.5 mL × 2

4. EIA緩沖液 30 mL × 1

5. 標記抗體稀釋液 12 mL × 1

6. 顯色底物：TMB溶液 15 mL × 1

7. 終止液 12 mL × 1

8. 洗滌緩沖液濃縮液 50 mL × 1

檢測原理：

本試劑盒采用固相夾心酶聯免疫吸附法ELISA.。預包被板上固定有捕獲抗體，將樣本和標準品加入孔中進行第一步反應。反應后，加入HRP標記的檢測抗體進行第二步反應。洗滌去除未結合的抗體后，加入四甲基聯苯胺TMB.顯色底物，顯色強度與目標分子的含量成正比。

檢測步驟：

1.加入空白對照   確定空白對照孔，每孔加入100 uL的“4號 EIA緩沖液”。

2.加入準備好的樣本和標準品   每孔加入100 uL準備好的樣本和標準品。

3.蓋上板蓋，進行孵育第一步反應。

4.洗滌   使用準備好的洗滌緩沖液洗滌板孔，并徹底去除液體。

5.加入準備好的標記抗體   每孔加入100 uL準備好的標記抗體。

6.蓋上板蓋，進行孵育第二步反應.。

7.洗滌   使用準備好的洗滌緩沖液徹底洗滌板孔，并完全去除液體。

8.加入“6號 顯色底物 - TMB溶液”   每孔加入100 uL TMB溶液。

9.避光孵育。

10.加入“7號 終止液”   每孔加入100 uL終止液。

11.測定吸光度O.D..   清除板底污垢或水滴，確認孔內液體表面無氣泡后，以空白對照為基準，測定標準品和樣本的吸光度。

測定波長：450 nm。如使用雙波長測定：主波長為450 nm，副波長為600～650 nm。

檢測結果計算方法：

1. 以標準品濃度為橫軸，吸光度O.D..為縱軸，繪制標準曲線。可使用適當的回歸曲線如雙對數轉換后的二次回歸.擬合各點。

2. 根據標準曲線，讀取待測樣本的吸光度對應的濃度值。

3. 將讀取的濃度值乘以樣本的稀釋倍數，計算最終濃度。

標準曲線示例及實測值：

備注1：

根據樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買。請務必使用本產品專用的EIA緩沖液。

備注2：**操作注意事項**

每次反應后請立即使用洗板機進行洗滌，設置等待時間為0秒。

洗滌時間越長，吸光度O.D..值可能越低。