IBL-大鼠血管緊張素總原檢測試劑盒丨操作手冊與試劑配制方法

本試劑盒可定量檢測大鼠血清和血漿樣本中的總血管緊張素原（包括完整型血管緊張素原和被腎素切割后的Des AI血管緊張素原）。

艾美捷IBL-大鼠血管緊張素總原檢測試劑盒：

貨號：27104-96Well

預期用途：研究用試劑

檢測方法：酶聯免疫吸附試驗（ELISA）

標記物：辣根過氧化物酶（HRP）

適用物種：大鼠

檢測樣本類型：血清、EDTA血漿

（※ 根據樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買，詳情請參考說明書。）

檢測范圍：0.08 - 5 ng/mL

第一步反應條件：2 - 8 ℃ 孵育過夜

第二步反應條件：2 - 8 ℃ 孵育60分鐘

靈敏度：0.009 ng/mL

特異性：可特異性檢測大鼠血清和EDTA血漿中的總血管緊張素原。

儲存條件：2 - 8 ℃

包裝規格：96孔板 × 1

備注1：根據樣本類型，可能需要額外添加EIA緩沖液。EIA緩沖液需另行購買。請務必使用本產品專用的EIA緩沖液。

備注2：**操作注意事項**

每次反應后請立即使用洗板機進行洗滌，設置等待時間為0秒。

洗滌時間越長，吸光度（O.D.）值可能越低。

試劑盒組成：

預包被板：（抗大鼠AGT（135）兔IgG親和純化）96孔 × 1

標記抗體濃縮液：（30×）HRP標記抗大鼠AGT（405）兔IgG Fab’親和純化 0.4 mL × 1

標準品：（重組大鼠血管緊張素原）0.5 mL × 2

EIA緩沖液 30 mL × 1

標記抗體稀釋液 12 mL × 1

顯色底物：TMB溶液 15 mL × 1

終止液 12 mL × 1

洗滌緩沖液濃縮液 50 mL × 1

檢測原理：

該試劑盒為固相夾心ELISA（酶聯免疫吸附試驗）。當一抗被涂覆在平板上時，樣品和標準品被加入到用于第一反應的孔。反應后，HRP偶聯的二抗加入孔中進行第二次反應。洗干凈后，解開次級將抗體四甲基聯苯胺（TMB）加入孔中并顯色。

操作手冊與試劑配制方法：

一、需自備但試劑盒中未提供的材料

酶標儀（Plate reader）

微量移液器及吸頭

稀釋用試管

量筒和燒杯

去離子水

洗板機（Plate washer）

紙巾

收集容器（例如：潔凈的一次性試管）

冰箱

二、準備工作

1、洗滌緩沖液的配制

將“8號 洗滌緩沖液濃縮液”用去離子水稀釋40倍，作為實驗用洗滌緩沖液。根據實際需要調整配制量。

2、標記抗體的配制

使用潔凈的收集容器，將“2號 標記抗體濃縮液”用“5號 標記抗體稀釋液”稀釋30倍，混勻后備用。

3、標準品的配制

向“3號 標準品”瓶中加入0.5 mL去離子水，充分溶解。溶解后標準品濃度為10 ng/mL。

配制好的標準品可分裝后冷凍保存，但不得反復凍融。

準備7支試管用于標準品稀釋，每管加入230 μL的“4號 EIA緩沖液”。

將10 ng/mL的標準品取230 μL加入第一支試管（Tube-1，5 ng/mL），輕輕混勻。

然后從Tube-1中取230 μL加入第二支試管（Tube-2，2.5 ng/mL），輕輕混勻。

依此類推，進行2倍系列稀釋，共配制7個濃度梯度的標準品，濃度范圍從5 ng/mL至0.08 ng/mL。

標準品稀釋濃度如下：

Tube-1：5 ng/mL

Tube-2：2.5 ng/mL

Tube-3：1.25 ng/mL

Tube-4：0.63 ng/mL

Tube-5：0.31 ng/mL

Tube-6：0.16 ng/mL

Tube-7：0.08 ng/mL

4、待測樣本的配制

使用本試劑盒中的“4號 EIA緩沖液”對待測樣本進行稀釋，稀釋比例如下：

大鼠血清或EDTA血漿：至少稀釋2,000倍。

如需大量使用EIA緩沖液，可另行購買“大鼠血管緊張素原EIA緩沖液（100 mL，產品編號：27104D100）”。

檢測結果計算方法：

1、以標準品的濃度為橫軸，吸光度（O.D.）為縱軸，繪制標準曲線?？墒褂眠m當的回歸曲線（如雙對數轉換后的二次回歸）擬合各點。

2、根據標準曲線，讀取待測樣本的吸光度對應的濃度值。

3、將讀取的濃度值乘以樣本的稀釋倍數，計算最終濃度。