AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶聯物：高靈敏度細胞標記工具

刀豆蛋白A（ConA）是一種凝集素，能特異性結合各種糖、糖蛋白和糖脂中的某些結構。Con A是一種眾所周知的T細胞有絲分裂原，可以激活免疫系統，招募淋巴細胞并引發細胞因子的產生。除了其促有絲分裂活性外，ConA還可以通過線粒體介導的凋亡和自噬誘導程序性細胞死亡。ConA也被報道可以激活NFAT（活化T細胞的核因子），NFAT是一個轉錄因子家族，在免疫系統的發育和功能中很重要，包括T細胞受體（TCR）的參與。ConA在生物學和生物化學中被廣泛用于表征各種細胞表面的糖蛋白和其他含糖實體。它還用于在凝集素親和層析中純化糖基化大分子，以及研究各種免疫細胞的免疫調節。ConA在B-聚糖分支結構的末端位置特異性結合α-D-甘露糖基和α-D-葡萄糖基殘基（兩種己糖，僅在碳2上的醇不同）。它有4個結合位點，對應于4個亞基。刀豆蛋白A（Con A）是細胞生物學中應用最廣泛的凝集素之一。iFluor?488標記的刀豆球蛋白A選擇性結合A-吡喃甘露糖基和A-吡喃葡萄糖基殘基，并可能顯示出最亮的綠色熒光。

圖：活HeLa細胞用iFluor?488刀豆蛋白A偶聯物以5?g/mL的濃度染色30分鐘。使用FITC濾光片組通過熒光顯微鏡獲取圖像。

艾美捷AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶聯物：

單位大?。? 毫克

目錄編號：25580

分子量：不適用

溶劑：水

校正因子（260 納米）：0.21

校正因子（280 納米）：0.11

消光系數（厘米 -1 M -1）：750001

激發（納米）：491

發射（納米）：516

量子產率：0.9

H-短語：H303, H313, H333

危害符號：XN

預期用途：僅限研究使用（RUO）

R-短語：R20, R21, R22

儲存：冷凍（< -15°C）；盡量減少光照

UNSPSC：12171501

除非另有說明，所有未使用的庫存溶液應在制備后分成單次使用的小份，并儲存在-20°C。避免反復凍融。

iFluor? 488-刀豆蛋白A標記物庫存溶液（200倍）

將500微升的ddH2O加入粉末中，制成2毫克/毫升的庫存溶液。

注意     重懸后的共軛溶液可在2-8°C短期儲存，或在-20°C長期儲存。

工作溶液的準備

iFluor? 488-刀豆蛋白A標記物工作溶液（1倍）

將5微升的200倍共軛溶液加入1毫升HHBS緩沖液中。

注意     不同細胞系的優化染色濃度可能不同。推薦的起始濃度為活細胞5-10微克/毫升。

樣品實驗方案

在打開前將小瓶預熱至室溫并短暫離心。染色方案因應用而異。應通過實驗確定共軛物的適當稀釋度。

活細胞染色

用HHBS緩沖液洗細胞兩次。

加入100微升iFluor? 488-刀豆蛋白A工作溶液。

在37°C下用工作溶液孵育細胞10-30分鐘。

用HHBS緩沖液洗細胞兩次。

使用FITC濾光片組在熒光顯微鏡下成像細胞。

固定細胞染色

刀豆蛋白A標記物也可用于染色固定細胞。

用4%甲醛在PBS中固定細胞。

注意     對于固定細胞膜染色，建議不進行通透化步驟。固定后的通透化步驟會導致細胞內結構如高爾基體和內質網（ER）結構染色。

加入100微升iFluor? 488-刀豆蛋白A工作溶液。

在室溫下用刀豆蛋白A共軛物工作溶液孵育細胞10-30分鐘。

用HHBS緩沖液洗細胞兩次。

使用FITC濾光片組在熒光顯微鏡下成像細胞。

AAT Bioquest-iFluor 488刀豆蛋白A偶聯物文獻參考：

Short-term high-fat diet intake leads to exacerbation of concanavalin A-induced liver injury through the induction of procoagulation state.

Authors: Nanizawa, Eri and Tamaki, Yuki and Sono, Reika and Miyashita, Rintaro and Hayashi, Yumi and Kanbe, Ayumu and Ito, Hiroyasu and Ishikawa, Tetsuya

Journal: Biochemistry and biophysics reports (2020): 100736

Montelukast ameliorates Concanavalin A-induced autoimmune hepatitis in mice via inhibiting TNF-α/JNK signaling pathway.

Authors: El-Kashef, Dalia H and Abdelrahman, Rehab S

Journal: Toxicology and applied pharmacology (2020): 114931

Acupuncture stimulation attenuates TNF-α production via vagal modulation in the concanavalin A model of hepatitis.

Authors: Lim, Hee-Don and Kim, Ki-Joong and Jo, Byung Gon and Park, Ji-Yeun and Namgung, Uk

Journal: Acupuncture in medicine : journal of the British Medical Acupuncture Society (2020): 964528420907338

Deficiency of O-linked-glycosylation regulates activation of T cells and aggravates Concanavalin A-induced liver injury.

Authors: Hao, Xiaohua and Gao, Meixin and He, Lingling and Ye, Xiaohui and Yang, Junru and Zhang, Fuyang and Liu, Ran and Wei, Hongshan

Journal: Toxicology (2020): 152411

Nicotine attenuates concanavalin A-induced liver injury in mice by regulating the α7-nicotinic acetylcholine receptor in Kupffer cells.

Authors: Zhao, Jing and Park, Surim and Kim, Jong-Won and Qi, Jing and Zhou, Zixiong and Lim, Chae Woong and Kim, Bumseok

Journal: International immunopharmacology (2020): 106071

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